【摘要】 目的  评价用自动生化分析仪免疫抑制比浊法测定糖化血红蛋白（HbA 1c ）的可靠性，并与常规方法（微柱法）作相关比较。 方法  根据美国国家试验室标准委员会（NCCLS）EP5-A、EP9-A文件要求进行方法精密度、准确度和线性范围的评价试验。 结果  该方法的批内和批间CV<4%，试验总不精密度为:x（HbA 1c ）为4.85%时，CV为2.8%;x（HbA 1c ）为10.7%时，CV为1.9%。HbA 1c 在3.0%～21%范围内线性良好。与BioSystems（Spain）公司的微柱法进行方法学比较，差异无显著性（n=84，Y=1.0385X+0.0504，r=0.9668，P>0.05）。 结论  按照CLIA，88的要求，以美国糖尿病学会要求的允许误差标准，糖化血红蛋白的总不精密度不超过5%来判断，免疫抑制比浊法测定糖化血红蛋白（HbA 1c ）的结果符合临床对糖尿病患者的治疗监测要求，该方法能进行自动化分析，免去手工操作，具有快速、准确、简便等优点，可广泛推广使用。

【关键词】  免疫抑制比浊法;糖化血红蛋白（HbA 1c ）;微柱法;方法学评价

目前，糖化血红蛋白（HbA 1c ）作为糖尿病筛选、诊断、血糖控制、疗效考核的有效监测指标，在临床中得到了广泛使用，2002年美国糖尿病协会（ADA）已将其作为监测糖尿病血糖控制的金标准 ［1］ 。检测糖化血红蛋白（HbA 1c ）的方法很多，有高效液相色谱法（HPLC）、离子交换层析微柱法、免疫抑制比浊法、电泳法等，高效液相色谱法（HPLC）被列为参考方法，但需要非常昂贵的仪器，离子交换层析微柱法基本上是手工操作，影响因素多。我科引进免疫抑制比浊法在自动生化分析仪上检测，为了检测结果准确可靠，在投入使用之前，我们进行了基本的分析性能指标的评价。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂和仪器 糖化血红蛋白（HbA 1c ）免疫试剂盒，相应的校准品和质控品，由Roche公司提供。微柱法试剂盒由BioSystems（Spain）公司提供。仪器为日立7060全自动生化分析仪。

1.1.2 对象 收集本院门诊和住院已确诊的糖尿病患者和健康人体检者的EDTA抗凝血，共84份，其浓度选择按照EP5-A、EP9-A文件中的要求。

1.2 方法

1.2.1 免疫抑制比浊法和微柱法测定糖化血红蛋白（HbA 1c ） 根据试剂盒使用说明书对全血标本做预处理和检测。自动分析仪主要测定参数，见表1。表1 自动分析仪主要测定参数（略）

1.2.2 准确度评价试验 ［2］  根据美国国家试验室标准委员会（NCCLS）EP9-A文件要求，做方法学比较试验。每天收集标本（8～10份），分别用免疫抑制比浊法和微柱法测定，连续测定5天，共计84份标本。两种方法测定结果做好纪录，以免疫抑制比浊法测定结果为Y轴，对比方法微柱法为X轴，进行回归分析和卡方检验。

1.2.3 精密度评价试验 ［2］  根据美国国家试验室标准委员会（NCCLS）EP5-A文件要求，做精密度评价试验。选择具有医学决定水平的正常和异常浓度的样本，为Roche公司的糖化血红蛋白（HbA 1c ）正常质控物和异常质控物（HbA 1c 百分比分别为4.85%和10.7%）。在校准的当天每隔1h测定1次，共测定10次，计算出均值、标准差和CV值为批内精密度;批间精密度每天取出这两种质控物各1份，放置室温混合均匀后，用免疫抑制比浊法测定，连续测定20天，所有测定均为双管平行测定，计算出均值、标准差和CV值为批间精密度。

1.2.4 线性评价 ［3］  从本院糖尿病患者中收集高HbA 1c 的全血，混合后为H标本;当天同时收集本院健康体检者的全血，混合后为L标本。按照5/5L、4/5L+1/5H、3/5L+2/5H、2/5L+3/5H、1/5L+4/5H、5/5H的比例配制成一系列浓度的样本。对每份样本做3次重复测定，记录结果。根据配制关系可以计算出6个样本的HbA 1c 百分比，为这些样本的预期值，将这些样本检测得到的检测值为实测值。以预期值作横坐标，实测值作纵坐标，做直线回归分析，观察其线性。

2 结果

2.1 精密度 该方法批内和批间CV<4%，试验总不精密度为:x（HbA 1c ）为4.85%时，CV为2.8%;x（HbA 1c ）为10.7%时，CV为1.9%。HbA 1c 百分比越大，CV值越小，按照美国临床试验室标准委员会（NCCLS）文件要求的批内批间不精密度水平应小于5%，该方法符合要求。

2.2 准确度（方法比对试验） 该方法与BioSystems（Spain）公司的微柱法进行方法学比较，差异无显著性（n=84，Y=1.0385X+0.0504，r=0.9668，P>0.05），其中b=1.0385，a=0.0504，b接近1，a接近0，r>0.95，符合临床试验要求。2.3 线性范围 该方法HbA 1c 在3.0%～21%范围内线性良好，将预期值和实测值进行比较，相关方程Y=1.012X+0.096，r=0.976，n=18。其中b=1.012，a=0.096，b接近1，a接近0，r>0.95，符合临床试验要求。

3 讨论

糖化血红蛋白（HbA 1c ）是血红蛋白的成分之一，生成缓慢，和血液中葡萄糖浓度持续升高呈正比，而与采血当时的血糖浓度并不相关 ［4］ ;由于葡萄糖可自由透过红细胞膜，血红蛋白的半衰期为60天，故糖化血红蛋白（HbA 1c ）可反映测定前1～2个月内血糖的平均水平，故可作为糖尿病长期监测的良好指标 ［5］ 。

目前，糖化血红蛋白（HbA 1c ）的测定方法主要有:离子交换高效液相色谱法、亲和层析法、免疫测定、电泳法等，有些方法需要贵重的仪器，有些方法手工操作太不方便，而我们引进的免疫抑制比浊法操作简便、快速，能在自动生化分析仪上进行自动化分析，从对其性能评价指标观察，其精密度高，重复性好，线性范围宽，批内和批间CV<4%，与BioSystems（Spain）公司的微柱法进行方法学比较，相关性良好。能完全满足临床对糖尿病患者的监测要求，可在使用自动生化分析仪的各型医院推广使用。 

【参考文献】

1 王笠，李琳.糖化血红蛋白的检测和临床应用.上海医学检验杂志，2003，18（2）:119-121.

2 杨昌国，许叶.线性评价和干扰试验中NCCLS评价方案的应用.临床检验杂志，1999，17（3）:47-49.

3 杨昌国，许叶.精密度评价和方法比较中NCCLS评价方案的应用.临床检验杂志，1999，17（1）:184-198.

4 王玉明，段勇.乳胶增强免疫比浊法测定糖化血红蛋白.现代检验医学杂志，2003，18（4）:6-8.

5 Krishnamuyti U，Stelfes MW.Glycohemoglobin:a primary predictor of development or reversal of complications of diabetes mellitrick.Clin Chem，2001，47:1157-1165.