将豚鼠血清用水合肼或氨水处理去除其中的C4，这种C4缺乏血清（简称R4）不能使致敏的SRBC溶解，当加入含有C4的受检血清后，级联酶促反应发生即可导致致敏的SRBC溶解。溶血的程度与待测血清中C4的活性相关。

1、无补体C4-抗原抗体复合物（EAR4）的制备  在新鲜豚鼠血清中按每ml加0.15mol/L氨水0.25ml或0.75mol/L水合肼0.25ml，混合后置37℃水浴30～90min，灭活其中的C4。用1mol/LHCl调节至pH7.2备用，取5%SRBC悬液与等体积4U溶血素混合为EA，然后按EA4ml与R40．25ml混合，室温放置15rain后使用；

2、在试管中加入反应物；

3、结果判定  按CH50方法进行。正常范围为8.270±2.087U/ml。