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沉淀反应实验五:对流免疫电泳实验(图)

标签: 沉淀反应 实验 火箭电泳

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五、火箭电泳实验

火箭电泳实际是一种定量免疫电泳。其原理为:在电场作用下,抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动,二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线,而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系,因此本法可以测定样品中抗原的含量。

1、材料

(1)诊断血清(抗体):抗人IgG或IgA免疫血清

(2)待检血清(抗原):人血清

(3)参考血清

(4)pH8.6,离子强度0.05M巴比妥缓冲液配制(见对流免疫电泳实验)

(5)其它:琼脂粉,微量进样器,打孔器,玻璃板,电泳仪

2、方法

(1)抗体琼脂板的制备

同单向扩散法,但注意稀释液应用pH8.6离子强度0.05M的巴比妥缓冲液。

(2)打孔见下图

(3)将用缓冲液稀释的适宜浓度的参考血清及适当稀释的抗原(人血清)分别加入各孔中,每孔10或20微升,要求加量准确而不外溢。

(4)把加完样的免疫琼脂板放入电泳槽中进行电泳,电压4—6伏/厘米,电泳时间1—5小时,直到大部分抗原孔前端出现顶端尖窄而完全闭合的火箭状沉淀线,关闭电源。

(5)取下琼脂板,以抗原孔中心为起点,量出各火箭状沉淀线的高度。同单向琼脂扩散法绘制标准曲线,查出待检血清中Ig含量。

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