五、火箭电泳实验 火箭电泳实际是一种定量免疫电泳。其原理为:在电场作用下,抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动,二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线,而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系,因此本法可以测定样品中抗原的含量。 1、材料 (1)诊断血清(抗体):抗人IgG或IgA免疫血清 (2)待检血清(抗原):人血清 (3)参考血清 (4)pH8.6,离子强度0.05M巴比妥缓冲液配制(见对流免疫电泳实验) (5)其它:琼脂粉,微量进样器,打孔器,玻璃板,电泳仪 2、方法 (1)抗体琼脂板的制备 同单向扩散法,但注意稀释液应用pH8.6离子强度0.05M的巴比妥缓冲液。 (2)打孔见下图 (3)将用缓冲液稀释的适宜浓度的参考血清及适当稀释的抗原(人血清)分别加入各孔中,每孔10或20微升,要求加量准确而不外溢。 (4)把加完样的免疫琼脂板放入电泳槽中进行电泳,电压4—6伏/厘米,电泳时间1—5小时,直到大部分抗原孔前端出现顶端尖窄而完全闭合的火箭状沉淀线,关闭电源。 (5)取下琼脂板,以抗原孔中心为起点,量出各火箭状沉淀线的高度。同单向琼脂扩散法绘制标准曲线,查出待检血清中Ig含量。 |
→如果您认为本词条还有待完善,请 编辑词条
上一篇ELISPOT标准化的建立(protocol) 下一篇临床细菌学
词条内容仅供参考,如果您需要解决具体问题
(尤其在法律、医学等领域),建议您咨询相关领域专业人士。
0