一、组织和细胞标本类型: (一) 组织标本类: 1、 石蜡切片:组织形态保存好 2、 冰冻切片:抗原性保存好 (二)细胞标本类: 1、组织印片 2、细胞培养片(细胞爬片) 3、细胞涂片 二、组织取材 1、脑组织和神经组织应采用灌注固定后,再进行后固定。 2、组织取材注意事项: (1)标本新鲜:组织要求离体后30min~2h内浸入固定液,尤其是开展分子生物学工作。动物组织取材要求心脏还在跳动时取材。 (2)注意防止人为因素的影响 刀和剪要快,避免挤压。 (3)组织块的大小 厚为0.1~0.3cm,大小可根据需要而定。 三、活细胞标本的制备法 (1)细胞大量培养后,经消化将细胞制成悬液(106)涂在涂有切片粘合剂的载玻片上,凉干后固定。 (2)将细胞直接培养在盖玻片上。 (3)将细胞直接培养在6孔或9孔板上,经固定后可行IHC。 |
四、石蜡切片的制备 1、由于石蜡不溶于水和醇类试剂,只溶解在二甲苯类试剂中。因而,组织经固定和水洗后含大量水分,需用乙醇类试剂进行脱水,水脱完后,组织内含有大量的乙醇,还必须用能溶解乙醇的二甲苯来置换,最后经浸蜡,组织细胞内被大量石蜡支称,才使组织能用于石蜡切片。 2、小动物组织脱水、透明和浸蜡时间 75%乙醇30min,85%乙醇30min,95%乙醇Ⅰ1h,Ⅱ1h,Ⅲ过夜或2h;无水乙醇Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ各30min;二甲苯Ⅰ15min, Ⅱ10min,Ⅲ10min;石蜡Ⅰ30min,石蜡Ⅱ30min,石蜡Ⅲ1~2h。 五、冰冻切片的保存和使用 1、冰冻切片固定后-80℃保存备用 2 、冰冻切片从-80℃取出,凉干或电吹风吹干后可直接进行免疫组化标记。 |
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