一、效应细胞的制备 激惹5天后,于无菌条件下取出受鼠引流的腹股沟淋巴结,100目钢网研磨,调整细胞浓度为2×107.ml-1。台盼蓝色要求存活率>95%。 二、靶细胞的制备 P815细胞株系DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞株。连续传代培养,调整细胞浓度为2×105/ml或3.33×105/ml(加入α-Lyt2 mAb时的靶细胞浓度),台盼蓝染色成活率>95%。 三、LDH释放法测定CTL的功能 按表1加样于96孔培养板中,设3个复孔。混匀置二氧化碳培养箱中孵育4h。室温离心,用微量加样器每孔取上清液100μl,送全自动生化分析仪测定每孔的LDH含量。 表1 LDH释放法测定CTL活性的加样情况(μl)
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