80年代的技术很经典，但那时分子生物学不够发达，现在方法有无进步呢?如何利用现在的技术来鉴定全新的病毒呢?有此想法很久了，可一直未搞清楚。这也跟如何发现一个新基因的道理是相通的。这是真正创新的基础。

网友alishang：我先来最简单的：
      1、采集各种病料，用各种细胞、宿主盲传，分离病毒，期望看到细胞病变。如果连细胞病变都没有，没折了？有别的办法证明有病毒吗？。
      2、纯化病毒，做电镜观察，与已有病毒形态、大小相似好办，要是完全不一样呢？？？如尼帕病毒和SARS，电镜看的出来。大家有看到发现新病毒的文献报道吗？
      3、可否直接抽病料中的基因组，来个大海捞针？不过怎么从中鉴定呢？
      4、电镜看不出形态、大小，纯化病毒跑二维电泳挖蛋白点测序行不？好象可行哦。
      我先想这么多，大家继续啊……

网友mark7447：这是一个很好的题目，不过应该有很多人在考虑，我谈谈我的想法。
      1、能不能找一种对所有病毒都敏感的细胞，当有新的病毒出现时，可以直接培养，无论有无CPE，先拿到病毒就可以进行下一步的工作了。
      2、可不可以用随机引物对生物标本进行扩增，测序后比对序列，定出是否是新的病原。
      3、急性期及恢复期的血液标本特别重要，一定要尽量收集多份总量的血清，进行中和实验等等。
      4、应该遵循郭霍法则，进行相关的动物实验研究。

网友alishang：经询问，你的第二点在测序公司是能实现的，第一点几乎是不可能完成的任务。

网友docxat：想知道如何鉴定，建议看看SARS的文献吧，好多哦。

网友黑山大王：我是这样做的：
      1、纯化病毒粒子，在电镜下观察其形态，如果病毒量大，可以制多抗 ，看看和已知的病毒有没有免疫交叉反应。
      2、蛋白N端测序---序列比较----PCR引物设计---PCR---测序---核酸序列比较。
      Sars的鉴定，相对大家可能是最浅显的例子，经电镜一看，心中就能有所判定(冠状)，能抓住方向。如果是一个全新的病毒，在形态上不能归类，只知道大小，如何往下做呢?

网友alishang说：鉴定一个全新的病毒，我想，要证明以下方面:
      1、不是已有的病毒;
      2、是新的
      3、有什么特性
      4、下结论，是什么病毒
      根据80年代的文献，这些是能实现的。关键是如何利用现有的技术?现有技术在解决这个问题上有无进步??

网友nylli的观点是：如前面的人所述，临床经验是相当重要的，还有组织病理知识等等一些基础也是必不可少的。关键是做出判断是否为新的病毒。

RISC网友的观点是：
      1、目前分离鉴定一种新型病毒确实很难，不只有技术上的限制，还有学术权威等潜在的影响。
      2、重视临床信息（体征、临床标本及辅助检查结果以及预后等等）与实验室工作的结合。有效的临床信息可以帮助缩小范围，为实验室工作的研究方案提供指导。
      3、传统的病毒盲传分离培养方法还是非常有效的，不能小看。目前还是作为一个金标准。
      4、借助分子生物学手段从核酸入手，比如可以根据目前已知的各个种属的病毒的保守区PCR引物，建立一个通用PCR引物库，将来有了高通量的技术平台时可以借助引物库进行快速鉴定。当然这也只是一个设想。
      5、蛋白水平的研究，比如2D电泳等将来达到一个比较成熟的技术平台，可以有效的进行病毒与宿主蛋白差异表达的研究，作为研究新型病毒的信息。
      一点拙见，请大家批评指正。

kinky网友的观点是：据说通过纯化病毒，做电镜观察其形态几乎是不可能的。因为病毒颗粒太小，要找到一个合适的视野特别难，所以这个方法是书本上说起来容易，实际操作起来难度很大。

freecell网友说：我的意见和RISC的差不多。新病毒的鉴定是个贯穿多学科的过程。
      第一：是重视临床鉴别诊断。例如2003年的SARS发现，就是通过与常见呼吸道病毒或其它病原微生物的症状进行鉴别，从而得到部分线索；
      第二：是血清学检验方法的运用。利用抗原捕捉ELISA，筛选和排除可疑病原体；采用双份血清IgG、IgM进行检测，分析抗体产生规律，摸清感染进程；
      第三：是经典病毒学方法的运用。接种细胞，产生CPE。但是HCV的细胞模型直到去年才建立起来。一般认为，在电镜下观察到病毒颗粒，是病毒鉴定的金标准；
      第四：是运用分子生物学方法，分别进行扩增，排除可疑病原体。在得到序列的情况下，进行BLAST，得到病毒的大致分类位置；
      第五：当然是功能基因组学和蛋白质组学方法了，例如基因芯片、2D等。有趣的是，轮状病毒不同型的鉴别，是通过SDS-PAGE实现的，而且至今尚在应用；
      值得一提的是，上述方法并非截然分开的，需要进行综合运用。鉴定一个全新的病毒，需要扎实的理论、丰富的经验、睿智的实验设计、大胆的推测演绎。

天行者007网友说：我们是按照以下步骤进行的（我们是做水产病毒鉴定与检测的）
      1、采集病料，分离细菌的有无，如没有细菌，进行电镜观察，根据病毒的形态初步鉴定
      2、利用可能敏感的细胞、分离病毒，观察细胞病变，电镜观察。
      3、利用宿主（鱼类）进行病毒的回归感染试验，观察病鱼的病症，同时进行电镜观察。
      4、纯化病毒，做电镜观察。
      5、直接抽病毒的基因组（分清是DNA还是RNA病毒），根据目前已知的各个种属的病毒的保守区PCR引物进行初步的PCR。
      6、进行病毒的基因组的酶切分析，同时采用AFLP分析（DNA病毒），切胶测核酸序列，进行Blast 比对（我们的结果就出来了）
      7、纯化病毒后进行一维、二维电泳挖蛋白点测序，应该可行，但是我们没有做

tgzhaoyujun网友的观点是：个人认为要确定是否是新的病毒，在出现病变或相应的生理反应或影响理论上应该出现的结果时，并且病原是滤过性的，可以怀疑是新病毒，不能纯化出病毒或在电镜下看到或出现CPE，不能否认病毒的存在。涓涓细流而成江河，遇到的人多了，总会出现转机的。

whw3791网友说：这是一个很有意思的话题，病毒首先得能通过滤膜，一般情况下最好有宿主的细胞株，有的病毒如马立克病毒是细胞毒，脱离细胞就不能生存，而有的病毒是很活泼的!病毒的确定要有丰富的临床经验!

noheart_ren网友的观点是：做病毒的，以下是我们的经典途径:tissue culture(CPE)-----EM observe(电镜)------serology test------histology，pathological character----molecular detection-----animal experiment

xiangtian2004网友的观点是：有的时候病毒未必能够培养成功，所以基因组应该是必须的。现在的微生物基因组学可以提供很多的有用的相关的信息，比如分析比对寻找相近的谱系。现在的病毒的基因文库也应该逐渐的完善丰富的，看过闻玉梅老师2001年的有关微生物基因组学国际大会的相关的许多述评，主要讲的微生物是细菌。最近几年的有关国际微生物基因组学的大会的文章还没有见到，没有来得及去搜索，不知目前的进展如何？

wuguojun680510网友的观点是：单纯凭分子生物学技术鉴定一个新的病毒是不可能的，只能得知可能是一个新病毒，鉴定一种新病毒还必需从经典途径走起。
      1、纯化病毒。
      2、大小、形态鉴定。
      3、对称形式确定
      4、核酸类型确定
      5、细胞嗜性鉴定
      6、分子生物学及生物信息学技术等

gengqingmao网友说：我刚学，不大懂！
      1、首先你要确认疾病主要是由病毒引起的；
      2、分离病毒，对于一个全新的病毒来讲，由于其培养特性及基因序列不知，本步骤是最难的。我认为首先可以充分利用临床病例，找出病毒集聚部位，利用动物实验进行感染，从相应部位分离滤菌液，然后进行培养，观察；
      3、对于没有明显CPE的病毒，我们也可以利用培养细胞的代谢变化（如PH值）来确定病毒感染。
      认识很浅显，并且没有实践经验，希望各位批评指正！谢谢！

hty333网友的观点是：
      1、要确认疾病主要是由病毒引起的；
      2、纯化病毒和形态鉴定；
      3、病毒核酸基因的分子生物学及生物信息学鉴定
      4、病毒的临床病理基理认证。

yangernan网友的观点是：根据症状判断是那类的病毒。然后提取病毒，做RT-PCR或PCR，争取把病毒整个基因组扩增出来，然后进行序列比对，功能基因组研究等。难就难在RT-PCR或PCR，引物的设计很难，不过多试验可能能成功。

phq629网友的观点是：大家好像对基因测序基于厚望，可能是我们接触的多、成本低，易做之故吧，但关键是病毒离不开细胞，所以如何保证随机扩增或鸟枪法获得的片断是未知病原的核酸，再者朊粒这类病原的存在，使该法存在一定的误区。最终还要回归经典方法。
      1、发现新病原肯定是由发病开始，所以与现有病原的临症、病理变化、流行病学等鉴别诊断是发现的关键；
      2、提取病料做回归试验看能否复制病例，确定为有病原（人最好有相对通用的动物模型）；
      3、通过体外培养、滤过性、染色显微镜观察等初步区分细菌或病毒；
      4、如疑为病毒可通过CPE、电镜、保护力试验、组织细胞嗜性结合临症、病理变化、流行病学、生理生化指标等综合分析初步对病毒分类，其中相对纯培养物的电镜结果是病毒的铁的证据，组织、血液病料结果受个人经验影响甚大，故纯化病毒是关键，也是后续新方法的基石；
      5、进一步展开大量生物学、分子生物学研究，全基因序列的确定是最终分类定位的最重要依据。
      对于基因芯片我觉得还是很有前途，但可能有朊粒的误区，2D电泳我觉得先得纯化病毒，再者需要很全的2D图谱，以后再细菌诊断上可能更适合。
      以上是我的拙见，一位尚外找到工作的小硕在此献丑，还望不吝赐教！

swzheng网友的观点是：
      1、选用各种细胞系培养，有CPE就好办；
      2、大量培养病毒；
      3、超离、纯化病毒；
      4、纯化的病毒提取核酸（RNA/DNA），随机引物进行PCR；
      5、电泳切500bp左右的PCR产物，纯化，克隆到T载体上；
      6、大量的质粒测序（大海捞针，老外是用96孔板来做）；
      7、所测序列做Blast；能否成功就看你运气了。

alang820216网友说：我觉得，最难就在病毒的分离，培养上。全新的病毒，只要我们有，应该通过一系列的方法是可以鉴定的。柯赫氏法则，分子生物学方法都要用！

贰拾面体网友说我们是这样做的：
      1、分离病毒：用96孔板接种多种细胞，将临床标本接种到细胞生长，分离病毒。虽然接种了多种细胞，也定会有漏网的雨。而且漏掉的还可能比没有漏掉的更有意义；
      2、透射电镜：尽管细胞出的CPE很好，也不一定能观察到病毒颗粒。我们曾经在一份标本的细胞培养物中的一个细胞浆中、一个视野里，同事捕获到大小不同的2个病毒颗粒；
      3、随机PCR：我们用细胞培养病毒提出RNA（根据电镜认为是RNA病毒），逆转录，P出若干个片段，连接T载体，测序、比对获得了2段病毒的序列；
      4、根据病毒序列，设计相对稳定区序列引物，测序......通过信息学，测绘其系统发生树......
      目前我们已经分离到接近9种病毒，鉴定出6株为已知的。呵呵，多数为已知的啊。

jiasheng1999网友的观点是：看了以上关于如何鉴定新病毒意见，自己也是从事病毒研究的。对病毒还有一点了解。于是也有点感想!
      1、发现新病毒最先是从其表型认识开始的。病毒的一个重要表型就是疾病(人们关心的较多)；
      2、如果病毒的表型很特殊(其实没有如果之说，因为表型总会有不同的，之所以发现不了是因为现有的手段不够或没被关注)，人们人容易想到它是一种新的。可能是一种全新的病毒，也可能是已有的变易株出现；
      3、分离这种新病毒(很关键) 。从唯物论说新病毒也要有物质性，要客观存在。当然说分离不到新病毒，并不一定说它不存在。但这是后续工作的基础；
      4、利用"科赫法则"，证明病毒的表性和病毒存在的正相关(可以说是因果关系)；
      5、排除他不是现有的病原。从病毒形态学特征-培养特性-血清学分析-分子生物学鉴定等；
      6、新病毒的分类学位置。首先确定新病毒属于哪个亚类:真病毒(核酸和蛋白)\类病毒(只有核酸)\朊病毒(只有蛋白质)，如果是真病毒要做以下工作:有无囊膜\核酸类型\核衣壳对称形式等；
      7、此外当科技飞速发展出现了一些新技术，如芯片技术\2D蛋白电泳等都是很好的工具。但是没有一种技术是完美的。所以不能简单认为所用技术越先进，得出的结果就越可信。传统看似简单的技术仍是鉴定新病毒的有力工具；
      8、鉴定新病毒的另个难点。病毒的表型不仅仅由基因组的一级序列或者是蛋白一级结构(朊病毒)决定。利用反向遗传操作技术，可以拯救出与原病毒基因组序列完全一致的病毒，但他们的表型却有差异。这就说明病毒的表型部分由基因组序列以外的东西决定(可能受宿主的某些成分影响)。对于朊病毒来说，病毒的"遗传物质"是正常机体"变坏"的蛋白，他与正常的蛋白在一级结构上(氨基酸序列)没有任何差别，而在高级结构上有差异。这种差异用现有依赖蛋白一级序列的技术根本无法区别。总之鉴定一种新的病毒不是一件容易的事啊!

fanjake网友的观点是：
      1、首先我们要明确鉴定病毒的目的，如想明确病因等；
      2、鉴定病毒的主要困难在于如何分离和纯化病毒；
      3、接着按照病毒的理化特征来鉴定病毒；
      如果想把传统电镜技术创新一下，对观察病毒形态可不可能容易一点;比如免疫电镜就是个例子;那还有其他的吗?

贰拾面体网友的观点是：
      1、用多种细胞（6～8种）同时做病毒分离。
      2、出现CPE者传代
      3、电镜
      4、根据电镜形态推测病毒种属，设计通用引物做PCR
      5、PCR失败后，用随机PCR
      6、病毒与疾病的相关性研究：双份血清难得，我们做了患者血清与同时期的一般发热血清、一般呼吸道感染患者血清、正常儿童健康查体血清和健康成人血清做了对比分析。

xiaochunwang网友的观点是：
      1、理化特征。利用电子显微镜观察病毒的大小和形态；利用电泳技术鉴定纯化病毒的结构蛋白大小及组成、确定基因组核酸的种类、大小及组成。
      2、克隆病毒基因组，测序后利用生物信息学的方法进行基因组结构分析。病毒基因组很小，克隆及测序工作不太复杂。
      结合上述两种方案可以初步鉴定是哪一种病毒，除了上面这些方法：也可以考虑metagenomics的策略：提取全基因组DNA并纯化，然后测序（454技术），然后生物信息学分析，然后BLAST，然后确定其phylogenetic 地位，最后又可能就鉴定了，但要想发表文章，尤其是发好文章，一定要分离病毒，并作进一步的致病性等分析研究，使结果更可信，更完善。