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支原体CCU测定

标签: 支原体 CCU测定

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生命经纬网友“园中木”要做支原体CCU,而不知道这个初始菌液的浓度如何选,因缺少标准的0.5麦氏浓度,所以比较困惑,看了相关文献有说将其定量到10的6次方左右,但又是如何定量的呢?

网友“ljksbs”问答:这个我以前做过,只能用倍比稀释法:取12只无菌试管,每管预先加入1.8ml支原体选择性液体培养基,在第一管中加入0.2ml待测菌液,充分混匀后从第一管吸出0.2ml液体加入第二管,再混匀,吸出0.2ml加入第三管,依次类推,到最后一管,放入30度培养,CCU的定值以最后一管出现颜色改变作为,即如果第五管发生颜色改变为最后一管,此CCU为10的5次方/ml.如果第六管颜色改变为最后一管,为10的6次方/ml。

由于支原体的液体生长是以颜色改变作为生长想象观察,其生长后的液体培养基仍然是澄清透亮的,只是颜色发生变化,不像大多数细菌液体是混浊的,因此用测OD值定量是行不通的.当然从理论上说固体的cfu平板浇注发也是可以行得通的,但是支原体的菌落很小,一般观察要在低倍镜下观察,照成研究人员的主观观察难度,易出现主观误差.因此支原体较好的定量方法还是倍比稀释的CCU较为简单可行,也是常用的.。

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