1 主题内容与适用范围 本文规定了食品中沙门氏菌的检验方法。 本文适用于航空食品的检验。 2 设备和材料 吸管(1ml、10ml)、恒温培养箱(36±1℃、42℃)、冰箱、均质器、振荡器、平皿、稀释瓶、天平、显微镜、接种棒等 3 培养基和试剂 缓冲蛋白胨水(BP)、氯化镁孔雀绿增菌液、四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液、亚硫酸铋琼脂(BS)、DHL琼脂、HE琼脂、WS琼脂、SS琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、靛基质试剂、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基、氨基酸脱羧酶试验培养基、糖发酵管、ONPG培养基、半固体琼脂、丙二酸钠培养基、沙门氏菌因子血清:按26种用于初步分型;57种用于进一步分型;163种用于详细分型。 4 检验程序 沙门氏菌检验程序如下: 5 操作步骤 5.1 前增菌 取检样25g,加入225mL缓冲蛋白胨水于均质杯内。用均质器以8000~10000r/min打碎1min,于36±1℃培养4h(干蛋品培养18~24h),移取10mL,转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液(MM)或四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液内,于42℃培养18~24h。同时,另取10mL,转种于100mL亚硒酸盐肮氨酸(SC)增菌液内,于36±1℃培养18~24h。 5.2 分离 取增菌液1环,划线接种于一个亚硫酸铋琼脂平板和一个DHL琼脂平板。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。于36±1℃分别培养18~24h(DHL)或40~48h(BS),观察各个平板上生长的菌落,沙门氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和沙门氏菌Ⅲ在各个平板上的菌落特征见表1。 表1 沙门氏菌属各群在各种选择性琼脂平板上的菌落特征 |
5.3 生化试验 5.3.1 自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落,分别接种三糖铁琼脂。在三糖铁琼脂内,肠杆菌科常见属种的反应结果见表2。 表2 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果 说明:在三糖铁琼脂内只有斜面产酸并同时硫化氢(H2S)阴性的菌株可以排除,其他的反应结果均有沙门氏菌的可能,同时也均有不是沙门氏菌的可能。 5.3.2 在接种三糖铁琼脂的同时,再接种蛋白陈水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基和赖氨酸脱竣酶试验培养基及对照培养基各1管,于36±1℃培养18~24h,必要时可延长至48h,按表3判定结果。按反应序号分类,沙门氏菌属的结果应属于A1、A2和B1,其他5种反应结果均可以排除。 表3 肠杆菌科各属生化反应初步鉴别表 5.3.3 反应序号A1:典型反应判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸3项中有1项异常,按表4可判定为沙门氏菌。如有2项异常,则按A3判定为弗劳地氏柠檬酸杆菌。 表4 5.3.4 反应序号A2:补做甘露醇和山梨醇试验,按表5判定结果。 表5 5.3.5 反应序号B1:补做ONPG。ONPG十为大肠埃希氏菌,ONPG-为沙门氏菌。同时,沙门氏菌应为赖氨酸+,但甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸-。 5.3.6 必要时按表6进行沙门氏菌生化群的鉴别。 表6沙门氏菌属各生化群的鉴别 5.4 血清学分型鉴定 具体内容见GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》中6.4。 5.5 菌型的判定和结果报告 综合以上生化试验和血清学分型鉴定的结果,按照GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》中表8或有关沙门氏菌属抗原表判定菌型,并报告结果。 注:本文参照GB/T4789.4-2003《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》 |
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