HO-1活性测定: 根据HO-1降解血红素生成胆红素和CO原理,以样品反应物中胆红素生成量代表HO-1活性。血清20μl中加入2mmol/L正铁血红素[血晶素(hemin),美国Sigma公司提供]40μl、4.5mmol/L还原型辅酶Ⅱ(NADPH,德国Boehyinger Mannheim公司提供,Na4-NADPH,纯度>98%)40μl,同一只健康豚鼠的肝组织匀浆上清液20μl(作为胆绿素还原酶的来源)、0.1mol/L 的KH2PO4缓冲液(pH 7.4)1.8ml,避光置37℃、10min,将反应物棕色小瓶置于冰上终止反应。不含NADPH的样品作空白对照,样品与空白均做双份,在分光光度计上用464nm和530nm双波长测定胆红素生成量(胆红素摩尔吸光系数:0.025nm/cm),以每小时每升血清生成胆红素量[nmol/(h*L)]为单位。 |
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