一、问:这段时间一直在做生物碱,流动相选择的是乙睛:0.02mol/l磷酸二氢钾(26:74),现在实验做完了,最后冲柱子。先长时间乙睛:水冲柱,再用甲醇:水冲柱,最后用甲醇冲柱。柱压一直很高,请问各位,是否不该这样冲柱?该怎样解决? Jimmy_ok:乙睛和甲醇没有多大区别的,只是乙睛黏度小,对于柱子保护有利,当然价格也高些,个人感觉完全可以用甲醇替代冲柱(当然实验室有钱就另说了)。从你的流动相上看,水性比例较大,且使用缓冲盐。所以冲柱子建议先5%甲醇1小时,然后50%甲醇,80%,100%甲醇各0.5小时,第二次开机时先用5%甲醇冲20分钟后再换流动相。柱压过高时可以采用低流速,长时间来冲。顺便提一句,流动相和样品都要严格过滤的! adashuishui:我的建议:1、如果你做最后一个样品的时候柱压还是正常的,那么可能就是冲柱出现了毛病。由于你的流动相采用了较大比例的缓冲盐,因而冲柱的时候要采用含水相较多的溶液低速冲洗,如果有机相的比例过高,磷酸二氢钾有可能结晶析出导致柱压升高。2、如果你做最后一个样品的时候柱压已经很高,那就是样品造成的。此时色谱柱的柱头已经遭到污染,因而需要清理。方法有:A、用流动相低速反冲;B、打开柱头,将污染物刮去(只有很薄的一层,大约3mm),然后用相同类型的已经废弃的色谱柱的出口端的填料将柱头填平(以少量甲醇调成膏状)。3、小心不要随便用别人用过的冲柱液,因为长时间放置的液体有可能进入粉尘,也有可能长菌。因而一定要保证其是干净的,没有颗粒存在(要过滤后使用)。 pantherww:1、我想你应该注意一下你的甲醇是不是HPLC级的,不是的话就应该先过滤在使用。 zslnutcm:由于流动相中有磷酸盐,所以实验结束时先用乙睛冲柱,有机溶剂会造成无机的磷酸盐析出,堵住了管路。建议先用温的纯水冲洗管路,看看能不能使压力降下来,再把泵的滤头拆下来,用甲醇超声清洗一下,或者干脆换个滤膜,应该会对你遇到的问题有帮助。 toyosa:一般柱压过高是最常碰到的问题。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的问题,您可按下面步骤检查问题的起因。 1、如果你有保护柱的话,拆去保护柱,看柱压是否还高,否则是保护柱的问题,若柱压仍高,再检查; 二、问:waters HPLC,zorbax extend-C18柱,乙腈-水(10:90)的流动相,0.5流速,柱压一直只有300多psi,排气泡多次也未见效果,哪位大侠指点一下问题出在什么地方? |
ameng:我的个人意见: 1、乙腈-水(10:90),0.5的流速,300psi的压力我觉得很正常啊,本人平时水100%冲洗时压力一般为800多psi(流速1),50%乙腈/水压力差别不大,在0.5的流速下面压力通常要比1ml时压力的一半还要小。因此个人认为300的压力正常。 三、问:有一个样品只能用四氢呋喃溶解(用纯甲醇则成混浊液),而我的流动相是甲醇比乙腈=90:10,柱子是hp的c8柱,柱长15cm,进样后发现柱压上升很高,然后用纯甲醇冲柱子,在流速为0.5/min的情况下,达到了110,而平时只有60,现在该怎么办?我的柱子是不是不行了?我尝试过反冲也没什么效果啊,很急,希望各位专家给个答复,谢谢!!! 星语心愿:1.请不要再用甲醇冲洗柱子了,那样你的柱子会堵塞,破坏会更大。你的样品在纯甲醇成混浊液,那用90%甲醇做流动相,肯定堵呀! 一草亭:柱压高我一般这样做: 1.按管路的反方向从后往前,采用一一坼卸的办法依次检查各个接口,特别是混样器处的前后接口,特别注意各道接口处的滤膜,拿下来超声(甲醇/水),一般经过全面的检查柱压就会降低很多。 四、有关柱压和保留的疑问 cidyling:关于柱压升高的解决方法,我有以下几点心得: 1、如果用了盐类流动相,在使用完毕后清洗柱子时要先用水置换出泵和柱子中的含盐流动相,然后用不同配比的甲醇或乙腈洗涤柱子,比如:5%、10%、20%、30%、90%。 |
xiangfree:我再给你的建议: 1、每次做完试验要冲柱,我个人经验先20%醇,再80%水(我试过先5%,再50%,再纯甲醇冲,等各种比例冲洗,但最后发现我说的那个比例冲洗效果是最好的)这是一般做法。 不过这只是我个人经验,可能不适合你呀! 五、问:我用C18反相柱、甲醇:磷酸二氢钠(0.01mol/L,pH7.0)(60:40)、1ml/min分离一个生物碱(长春新碱,弱碱)的硫酸盐,在走完流动相后没有用水过渡,直接用甲醇冲洗,怀疑是磷酸盐析出,柱压渐升高至40多MPa,后又用水冲洗,柱压降至29MPa左右,后又用甲醇、乙腈冲洗,在0.5ml/min条件下柱压即达20MPa左右,请问,柱子是磷酸盐析出还是有否可能生物碱析出?接下来如何处理?冲洗到柱压多少就基本完成? apple342:既然水冲有效,就继续用水冲吧,柱压应与你上流动相前用同流速同温度水冲时的压力差不多,如果你做了记录的话,不然,你就只好多冲几个钟头,建议用90%的水,10%的甲醇。如果着急还可以把水稍加热,使盐溶得更快更干净。用水冲时,如果压力下来了,最好把流速打到1.2ml/min冲一下,把泵头上的盐洗掉。 xwcheng:你的柱子应该是磷酸盐的析出导致柱压过高! 再生方法: |
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