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HPLC基础知识

标签: 高效液相色谱法 HPLC 基础知识

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鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多,因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。

(一)概论

一、液相色谱理论发展简况

色谱法的分离原理是:溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时,由于与固定相(stationary phase)发生作用(吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和)的大小、强弱不同,在固定相中滞留时间不同,从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特(Tswett)在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的,色谱法(Chromatography)因之得名。后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相,称为经典液相色谱法,此方法柱效低、时间长(常有几个小时)。高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography,HPLC)是在经典液相色谱法的基础上,于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀,小颗粒具有高柱效,但会引起高阻力,需用高压输送流动相,故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography,HPLC)。又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography,HSLP)。也称现代液相色谱。

二、HPLC的特点和优点

HPLC有以下特点:

高压——压力可达150~300Kg/cm2。色谱柱每米降压为75Kg/cm2以上。
  高速——流速为0.1~10.0 ml/min。
  高效——可达5000塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达100种。
  高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达0.01ng。同时消耗样品少。

HPLC与经典液相色谱相比有以下优点:

速度快——通常分析一个样品在15~30min,有些样品甚至在5min内即可完成。
  分辨率高——可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。
  灵敏度高——紫外检测器可达0.01ng,荧光和电化学检测器可达0.1pg。
  柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离不同的化合物。
  样品量少,容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏,可以收集单一组分或做制备。

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