1、准备1mTU/HOBt溶液 1)配制0.5mol/LHOBt的DMF溶液:称量13.5g无水HOBt(相对分子质量135.1),置于250ml烧杯中,加入DMF至200ml。 2、氨基基团与生物素结合 1)用DMF洗涤0.1mmol树脂。 3、将Fmoc氨基酸装入2-ChlorotritylChloride柱中 1)用反应管道称量log 2-ChlorotritylChloride树脂(15mmol),用2XDMF洗涤后,在50ml的DMF中浸泡10min,排尽管道中的液体。 4.检查含有Fmoc氨基酸树脂的替代率 1)用微量离心管称量双份5~10mg含Fmoc氨基酸树脂样品,加1.00ml20%六氢吡啶/DMF,振荡20min后,离心使树脂沉降。 |
5、Fmoc合成的步骤 1)用4XDMF洗涤树脂后排尽液体。 6、用Fmoc-磷酰酪氨酸合成含磷酰酪氨酸的肽段 所需试剂:Na-Fmoc-O-磷酰酪氨酸1g。 1)若用ABI多肽合成仪进行0.1mmol或0.25mmol的合成,使用0.483gFmoc-Tyr(PO3H2)-OH(1mmol)即可,将Fmoc-Tyr(PO3H2)-OH装好备用。 7、被保护肽段的脱离 原始树脂:Chlorotrityl树脂;lg含肽段树脂所需试剂:1ml乙酸(AcOH):2ml。 1)准备上述试剂的混合溶液。 8、固相结合的Fmoe-lys(Mtt)的Mtt基团脱除 所需试剂:Fmoc-Lys(Mtt)-OH1g。 1)在DCM中浸泡树脂使其膨胀。 |
9、肽段的FITC标记 所需试剂:FITC1g,Fmoc-Ahx-OH1g。 1)在标准结合条件下将Fmoc-Ahx-OH与肽段的氨基酸N端结合。 |
→如果您认为本词条还有待完善,请 编辑词条
词条内容仅供参考,如果您需要解决具体问题
(尤其在法律、医学等领域),建议您咨询相关领域专业人士。
0