关键词：家兔热原实验法 标准操作规程

目的：通过家兔热原实验法对药品进行热原检查

主体内容：

1.目的

建立热原检查法标准操作规程，指导操作者正确操作，确保检验结果的准确性。

2.范围

适用于药品的热源检查——家兔法。

3.责任者

质量保证部门对本SOP的实施负责。

4.规程

制定依据：《中国药典》2005年版二部附录ⅪD；中国药品检验标准操作规程（2005年版）。

4.1实验材料及用具

4.1.1 天平 精度0.01 mg或0.1mg 供试品称量用

精度0.1 mg或1mg 试剂称量用

精度10g 家兔称重用

4.1.2  电热干燥箱（50～300±1）℃。

4.1.3  恒温水浴（37～100±0.5）℃。

4.1.4  热原测温仪或肛门体温计，精度0.1℃。

4.1.5  家兔固定盒 盒的两侧有通气孔。

4.1.6  实验用具 注射器、烧杯、三角瓶、大称量瓶、吸管、移液管、表面皿、玻璃棒、广口试剂瓶、金属制密封器（均需去热原）、时钟、直镊、脱脂棉或细软卫生纸。

4.1.7  试剂 75%乙醇、凡士林或50%甘油、生理盐水、灭菌注射用水（经细菌内毒素检查,含内毒素低于0.25EU/ml）、无热原氯化钠（经250℃30分钟或200℃1小时或180℃2小时加热除热原）。

4.2  溶液配制 供试品溶液

4.2.1  原料药

4.2.1.1  精密称取适量，置烧杯、三角瓶或称量瓶中。

4.2.1.2  按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水或生理盐水，搅拌使溶解。

4.2.2  注射液

4.2.2.1  用75%乙醇棉球消毒安瓶颈部，割开安瓶。

4.2.2.2  精密量取一定量药液。

4.2.2.3  按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水或生理盐水，混匀。

4.2.3  粉针剂

4.2.3.1  用75%乙醇棉球消毒安瓿颈部或小瓶瓶塞。

4.2.3.2  加入一定量规定的溶媒配成所需浓度。

4.3  实验动物

4.3.1  健康无伤、体重1.7～3.0kg、同一来源、同一品系家兔，雌兔应无孕，1兔1笼，标兔号。

4.3.2  新兔预选

4.3.2.1  新免经饲养7日后，进行预测体温，测温的条件与热原检查要求相同。

4.3.2.2  测量体温时，测温仪探头或肛门计插入肛门的深度各兔应相同约6cm，测温时间不得少于1.5分钟。

4.3.2.3  每30分钟测温1次，共8次。

4.3.2.4  8次体温均在38.0～39.6℃（一般多选用38.4～39.4℃）的范围内，且最高最低体温差数不超过0.4℃（以不超过0.35℃为佳）的家兔，可供3周内实验用。

4.3.2.5  录选新兔编号、登记入兔史记录卡，未被录选家兔，可饲养7日再予测体温1次，如仍不符合要求则淘汰。

4.3.3  家兔的重复使用

4.3.3.1  供试品判定为符合规定的家兔，至少应休息2日，方可供下一次实验用。

4.3.3.2  供试品判定为需重复实验的家兔，应暂作休息处理，如重复合格，升温≥0.6℃的家兔，应重新测温挑选。

4.3.3.3  供试品判定为不符合规定的，家兔不再使用。

4.3.3.4  每一家兔的使用次数，最多为10次，体重逐渐减轻或超过3.0kg的家兔，不再使用。

4.3.4  复试用家兔 挑选体重在2.0～2.4kg、正常体温在38.8～39.2℃、使用过2～3次的家兔进行实验。

4.4  试验前的准备

4.4.1  测温仪或肛门温度计每3～6个月校验一次，不符合要求者不能使用。

4.4.2  用具的除热原 清洗干净的玻璃器皿、注射器、针头、直镊等放入金属制容器内，密闭，置电热干燥箱中经250℃30分钟或200℃1小时或180℃2小时加热除热原。去除热原未曾开启的密封容器内用具，可供一周内使用。

4.4.3  实验室的温度

4.4.3.1  实验室的温度应在17～28℃范围内。

4.4.3.2  实验室与饲养室的温度相差不得大于5℃。

4.4.3.3  试验全过程中，室温变化不得大于3℃。

4.5  检查法

4.5.1  选符合规定的家兔，停止给饲料和水，称重后置于家兔固定盒内至少1小时。

4.5.2  每隔30分钟测量家兔体温1次，一般测量2次，两次体温之差不得超过0.2℃，以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。

4.5.3  当日使用的家兔，正常体温应在38.0～39.6℃范围内，且各兔间相差不得超过1℃。

4.5.4  每个供试样品用家兔3只，在测定正常体温后15分钟内给药。

4.5.4.1  每个供试品的剂量，应按各该药项下的规定注射，未规定剂量的药品，可根据该药的药理性质，在不影响家兔正常生理的前提下，按体重计算（人按50kg计），用临床一次剂量的3～10倍。

4.5.4.2  供试品注射的体积，按家兔体重每kg不小于1ml，不大于10ml。体积在5～10ml/kg的溶液应在37～38℃预热后注射。

4.5.4.3  供试品配制完毕后，应在30分钟内注射于家兔体内。

4.5.4.4  注射前，先用75%乙醇棉球轻擦耳静脉的注射部位，从耳尖端静脉进针，如进针不利，应顺序向前进行。

4.5.4.5  注射完毕，拨出针头时，按住针孔数秒钟，止血。

4.5.4.6  需缓慢注射的药液，注射时间（除另有规定外）一般每兔不超过5分钟。

4.5.5  给药后每隔30分钟测量体温1次，共6次。

4.5.6  温差计算

4.5.6.1  注射药液后，以6次测得体温中最高的一次减去正常体温，为该兔体温的升高度数，如6次体温均低于正常体温，则升温度数以“0”计。

4.5.6.2  6次体温中最低的一次，减去正常体温，即为降温值。

4.6  结果判断

4.6.1  判断复试

4.6.1.1  初试3只家兔中仅有1只体温升高0.6℃或0.6℃以上，或3只家兔升温均低于0.6℃但升温的总数达1.4℃或1.4℃以上；应另取5只家兔复试。

4.6.1.2  含有热原的供试品，一般在给家兔静脉注射后1～2小时出现升温高峰，当第3小时升温≥0. 6℃时，宜复试后再作判断。

4.6.1.3  3只家兔中有1只降温≥0. 6℃，或3只家兔中有2只降温值在0.45～0.55℃，应另取3只家兔复试。

4.6.2  判断合格

4.6.2.1  初试3只家兔中，体温升高均在0. 6℃以下，并且3只家兔升温的总数在1.4℃以下可判断为符合规定。

4.6.2.2  复试5只家兔中，体温升高0. 6℃或0. 6℃以上的家兔数仅有1只，并且初复试合并，8只家兔的升温总数为3.5℃或3.5℃以下，可判断为符合规定。

4.6.3  判断不合格

4.6.3.1  初试3只家兔中，体温升高0. 6℃或0. 6℃以上的家兔数有2只或3只，可判断为不符合规定。

4.6.3.2  复试的5只家兔中，体温升高0. 6或0. 6℃以上的家兔有2只或2只以上，可判断为不符合规定。

4.6.3.3  初复试合并8只家兔的升温总数超过3.5℃，可判断为不符合规定。

4.6.4  新兔购买记录卡。

4.6.5  热原检查兔史记录卡。

4.6.6  新兔预测体温记录表。