问:什么是QPCR? 答:QPCR的英文全名是Real-time Quantitative PCR Detecting System。即实时荧光定量核酸扩增检测系统,也叫实 问:QPCR、DNA检测、PCR之间的关系? 答:聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction简称PCR)原理凭借敏感、特异、快速的特点荣获93年诺贝尔化学奖。因其在病原体检测方面的独特优势,因而发达国家在相关方法和仪器方面的研发非常快,成为分子生物学诊断的主流,至今仍处于学术和应用前沿: 第一代产品: 基因扩增热循环仪(DNA Thermal Cycler)+电泳仪+紫外分析仪+定性试剂,构成PCR定性检测。 第二代产品: 基因扩增热循环仪+荧光仪+终点定量试剂,构成PCR-DNA终点法定量检测(End-point quantitative PCR detection),又分为终点酶免定量( End-point ELISA-PCR)和终点荧光定量(End-point Fluor-PCR)两种。 第三代产品: 实时定量QPCR仪+实时荧光定量试剂,构成QPCR-DAN/RNA实时荧光定量检测。 问:相比以前的方法,QPCR有哪些特点? 答:QPCR至少有以下特点: 所用仪器少,只用一台仪器。 检测时间短,只须45分钟~1小时10分钟(试剂各异),而定性PCR须3~4小时,酶免终点定量须6~8小时,荧光终点定量须2~3小时。 操作极其简单:前处理后,样本插入仪器一小时后到电脑上来出报告即可,无须开盖,移样本(以前方法),避免污染。 结果精确:定性PCR只能定性,很粗略,终点定量PCR由于只能在40个热循环结束后检测荧光,被测荧光达到饱和导致定量不够精确,属于半定量状态。而实时荧光QPCR是在扩增的每时每刻连续检测各样本的荧光值的变化。 检测动态范围:10~10000000000 DNA copies/ml 检测精度:0.1RLU 辨别率:5000和10,000个模板拷贝样本的辨别率99.7%。 问:QPCR的技术先进性、价格及应用现状? 答:实时荧光QPCR是当今世界用于临床的最先进核酸分子诊断技术,被美国FDA承认并推崇,被美国FDA批准并取得临床应用执照的QPCR试剂品种有: HBV乙肝病毒DNA,HCV丙肝病毒RNA,HIV艾滋病病毒RNA,Chlamydi trachomatis(CT),性传播疾病,沙眼衣原体,Neiserria gonorrhea(NG),性传播疾病,淋病双球菌,Cytomegalovirus(CMV),性传播疾病,巨细胞病毒,Mybobacterium tuberculosis(Mtb),呼吸道疾病,结核分支杆菌等。 实时荧光PCR仪研发技术难度大,门槛高,发达国家也只有有限几家知名公司生产,且售价昂贵:如 可见,在病人看来,哪家医院应用了QPCR技术便是先进诊断技术的象征,在发达国家也是如此。 日本独资杭州博日实时荧光QPCR仪(33孔) 西安天隆科技有限公司TL988实时荧光QPCR仪(48孔) 多家公司生产实时荧光QPCR试剂盒,价格与终点法试剂相当,且品种齐全,价格便宜,购买方便: |
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