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标签: Real Time PCR
引物的设计相对于普通的PCR来说,还是有一些更为严格的要求:
1、引物的退火温度要高,一般要在60度以上;
2、引物的产物大小不要太大,一般在80-250bp之间都可;
3、引物一般要设计在目的基因中跨内含子的位置,这样可以避免在存在DNA污染的情况下,对目的片断的额外的扩增;
4、对于定量PCR来说,特别是在使用sybr green的情况下,引物二聚体的存在对结果的干扰较大,所以在选择引物时要尽量避免容易形成二聚体的引物。
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