一、准备工作 1、实验器具与材料: (1)移液枪:200ul、10ul (2)吸头:200ul、20ul (3)吸头台:放置200ul和20ul的吸头一个 (4)EP管1.5ml、100ul 2、实验器具的处理与准备 塑料制品:(包括吸头、EP管等) 送至高压3次,试验前将枪头放入吸头台。 3、试剂配制和准备: (1) 双蒸水: 100ml盐水瓶内装40ml蒸馏水,送至高压,后分装到几个1。5mlEP管中,-20℃中保存备用。 (2) PCR中所需要的各种试剂 三、PCR时注意事项: 佩戴一次性手套,同时避免戴上的一次性的手套接触可疑污染物。 四、PCR步骤 1、准备100ul EP管 2、依次在管中加入:(50ul反应体系)
3、稍离心 4、100℃沸水浴1分钟 5、趁热加入Tag酶0.5ul(冰上操作) 6、再加入50ul液体石蜡封闭 7、10000rmp离心1分钟 8、PCR条件 94℃ 1min 58℃ 50sec 72℃ 1min30sec 进行40个循环,然后72℃ 10min 完后4℃保温。 9、10000rmp离心5min 10、将下层水相转入新的0.65mlEP管中,-20℃保存。 |
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