提高体系的灵敏度,从优化体系开始,镁离子浓度,引物探针浓度等。 以前公司的一步法RT-PCR荧光定量,在逆转录后,有五个三温度循环,这五个循环不检测荧光,然后再加上40个两温度循环,这40个循环检测荧光。(这个增加循环数的方法,除非在比较严格的实验室可行,因为怕假阳性结果) 而在样品处理过程中,提取RNA时,加糖原促进RNA更多的沉淀出来。 糖原对提取细胞或者少量组织中的RNA有比较显著的效果。 |
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