采用Ⅲ级生物安全柜可以提供最好的个体防护，主要用于四级生物安全实验室。

Ⅲ级生物安全柜的所有接口都是“密封的”，其送风经HEPA过滤，排风则经过两个HEPA过滤器。Ⅲ级生物安全柜由一个外置的专门的排风系统来控制气流，使安全柜内部始终处于负压状态（大约124.5Pa）。

只有通过连接在安全柜上的橡胶手套，手才能伸到工作台面。Ⅲ级生物安全柜应该配备一个可以灭菌的、装有HEPA过滤排风装置的传递仓，并能与双开门的高压灭菌器对接。可根据实际工作需要将几个Ⅲ级生物安全柜串联。