问:向大家请教脂肪酶活力的测定方法、仪器、试剂。多谢指教! 答:这是我从一篇文献中找到的。用酸价作指标, 用95%乙醇作终止剂, 通过酸价的测定反映脂肪酶分解脂肪的程度, 从而求得酶活力。 方法: 1、粗酶液的制备 用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸馏水溶解并定容至100 mL, 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。 2、实验设计 本实验以10 mL色拉油为底物,以酶用量、水解温度、反应时间为因素,通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。 3、酸价的测定 酸价是指中和1 mol游离脂肪酸所需NaOH的毫克数, 它用于衡量油脂的水解程度。实验中用酸碱滴定法测定水解液的酸价, 参照文献[ 3, 4 ]中所使用的方法, 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液, 摇匀, 终止反应, 并加入2滴酚酞指示剂, 迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微红色, 在30 s内不消失为终点, 记录消耗的NaOH溶液毫升数(V ) 。用同样的方法测定空白值, 每个试验重复两次, 以平均值作为测定结果。 酸价按下式计算: 4 粗脂肪酶活力的测定 在最佳水解条件下, 分别测得粗脂肪酶和标准脂肪酶水解液的酸价X1、X2 , 根据公式U1 /U= X1 / X2求得粗脂肪酶的活力, 其中U1为粗脂肪酶活力, U为标准脂肪酶活力。 5标准脂肪酶液的配制 根据实验最佳条件, 配制标准脂肪酶液。一篇相关文献 粗脂肪酶活力的测定方法的研究.pdf 答:实验设计,本实验以10 mL色拉油为底物,以酶用量、水解温度、反应时间为因素,通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。用色拉油作底物不太妥,一般是用橄榄油,化学纯的。 |
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