11、苯丙氨酸培养基 成分: 制法:加热溶解后分装试管,121℃高压灭菌15min,使成斜面。 试验方法:自琼脂斜面上挑取大量培养物,移种于苯丙氨酸琼脂,在36±1℃培养4h或18~24h.滴加10%三氯化铁溶液2~3滴,自斜面培养物上流下,苯丙氨酸脱氨酶阳性者呈深绿色。 12、氨基酸脱羧酶试验培养基 成分: 制法:除氨基酸以外的成分加热溶解后,分装每瓶100ml,分别加入各种氨基酸:赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸、L-氨基酸按0.5%加入,DL-氨基酸按1%加入,再行校正pH至6.8,对照培养基不加氨基酸,分装于灭菌的小试管内,每管0.5ml,上面滴加一层液体石蜡,115℃高压灭菌10min。 试验方法:从琼脂斜面上挑取培养物接种,于36±1℃培养18~24h,观察结果.氨基酸脱羧酶阳性者由于产碱,培养基应呈紫色。阴性者无碱性产物,但因葡萄糖产酸而使培养基变为黄色,对照管应为黄色.。 13、蛋白胨水(靛基质试验用) 成分: 制法:按上述成分配制,分装小试管,121℃高压灭菌15min。 试验方法:挑取小量培养物接种,在36±1℃培养1~2d,必要时可培养4~5d,加入柯凡克试剂约0.5ml,轻摇试管,阳性者于试剂层成深红色;或加入欧-波试剂约0.5ml,沿管壁流下,覆盖于培养液表面,阳性者于液面接触处呈玫瑰红色。 注:蛋白胨中应含有丰富的色氨酸.每批蛋白胨买来后,应先用已知菌种鉴定后方可使用。 |
14、硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 成分: 制法:加热溶解,校正pH,分装试管,115℃高压灭菌15min,取出直立候其凝固。 试验方法:挑取琼脂培养物,沿管壁穿刺,于36±1℃培养1~2d,观察结果.产硫化氢者使培养基变为黑色。 注:肠杆菌科细菌测定硫化氢的产生,应采用三糖铁琼脂或本培养基。 15、尿素琼脂 成分: 制法:将除尿素和琼脂以外的成分配好,并校正pH,加入琼脂,加热溶化并分装烧瓶,121℃高压灭菌15min,冷至50~55℃,加入经除菌过滤的尿素溶液,尿素的最终浓度为2%,最终pH应为7.2±0.1,分装于灭菌试管内,放成斜面备用。 试验方法:挑取琼脂培养物接种,在36±1℃培养24h,观察结果,尿素酶阳性者由于产碱而使培养基变为红色。 16、氰化钾(KCN)培养基 成分: 制法:将除氰化钾以外的成分配好后分装烧瓶,121℃高压灭菌15min,放在冰箱内使其充分冷却,每100ml培养基加入0.5%氰化钾溶液2.0ml(最后浓度为1:10000),分装于12mm×100mm灭菌试管,每管约4ml,立刻用灭菌橡皮塞塞紧,放在4℃冰箱内,至少可保存两个月,同时,将不加氰化钾的培养基作为对照培养基,分装试管备用。 17、氧化酶试验 试剂: 试验方法:取白色洁净滤纸沾取菌落,加盐酸二甲基对苯二胺溶液一滴,阳性者呈现粉红色,并逐渐加深;再加α-萘酚溶液一滴,阳性者于半分钟内呈现鲜蓝色,阴性于两分钟内不变色。以毛细吸管吸取试剂,直接滴加于菌落上,其显色反应与以上相同。 |
18、 硝酸盐培养基 成分: 制法:溶解,校正pH,分装试管,每管约5ml,121℃高压灭菌15min。 试验方法:接种后在36±1℃培养1~4d,加入甲液和乙液各一滴,观察结果:硝酸盐还原为亚硝酸盐时于立刻或数分钟内显红色。 注:本试验阴性的原因有三:细菌不能还原硝酸盐;亚硝酸盐继续分解,生成氨和氮;培养基不适于细菌的生长。如欲检查培养基中硝酸盐是否未被分解,可再加入锌粉少许,可使硝酸盐还原为亚硝酸盐而呈现红色。 19、 细胞色素氧化酶试验 试剂: 试验方法:取37℃(或低于37℃)培养20h的斜面培养物一支,将两种试剂各2~3滴,从斜面上端滴下,并将斜面略加倾斜,使试剂混合液流经斜面上的培养物,如系平板培养物,则可用试剂混合液滴在菌落上。 结果:于2min内呈现蓝色者为阳性。阳性培养物大多数于半分钟内出现强阳性反应,2min以后出现微弱或可疑反应均作为阴性结果。 20、过氧化氢酶试验 试剂: 试验方法:挑取固体培养基上菌落一接种环,置于洁净试管内,滴加3%过氧化氢溶液2ml,观察结果。 结果:于半分钟内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性。 |
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