①制备饲养细胞悬液

②转染了重组质粒后的细胞计数，并调细胞数在1～5×10^３/ml

③取130个细胞放入6.5ml含饲养细胞完全培养液，即20个细胞/ml，100μl/孔加A、B、C三排为每孔2个细胞。余下2.9ml细胞悬液补加2.9ml含饲养细胞的完全培养液，细胞数为10个/ml，100μl/孔加D、E、F三排，为每孔1个细胞。余下2.2ml细胞悬液补加2.2ml含饲养细胞的完全培养液，细胞数5个/ml，100μl/孔，加G、H两排，为每孔0.5个细胞。

④培养4～5天后，在倒置显微镜上可见到小的细胞克隆，补加完全培养液200μl/孔。

⑤第8～9天时，肉眼可见细胞克隆。