求助者：wjg200022

最近我在测细胞内的钙浓度，用的是fluo-3 探针，但选多大的激发，发射波长很为难，有文献用的是488/515nm，有的用的506/526nm，我打算用流式细胞仪测，有做过这方面的给点指点，谢谢。

此外我找到一段原话：“Fluo-3 AM是一种可以穿透细胞膜的荧光染料。Fluo-3 AM的荧光非常弱，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。Fluo-3 AM进入细胞后可以被细胞内的酯酶剪切形成Fluo-3，从而被滞留在细胞内。Fluo-3可以和钙离子结合，结合钙离子后可以产生较强的荧光，最大激发波长为506nm，最大发射波长为526nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右，发射波长为525-530nm“。

生命经纬网友otherwise认为：

荧光染料的吸收和发射光谱都是一个范围，不是只有一个波长

吸收光谱范围内任何波长的光都可以激发，只是效率不同而已，发射光谱是一样的

下图是fluo-3的荧光光谱

可见500nm左右的光都可激发，峰值在506.

一般流式带的氩离子激光器有458，488，514 三个波长，488 514都可以用

或者用汞灯做光源，加上506左右的带通滤光片

发射范围在500nm-650nm，峰值在526nm，用该范围的带通滤光片即可