【求助】钙离子的测定

参与者：99shaoshuai

请问各位师兄，师姐，用Fura-2/AM标记，荧光双波长测细胞内钙离子浓度时，悬浮细胞时，悬浮液里含不含Ca²⁺，Mg²⁺离子？如果含Ca²⁺，Mg²⁺离子的话，会不会影响细胞内钙离子的测定？为什么？非常感谢！

参与者：yangchunzhang1

AM基团可以特异的标记细胞内游离钙离子，因而不用担心外液的影响。具体机制请参照染料的说明书。

没有AM基团的Fura-2一般用于显微注射，对细胞的要求比较高。

参与者：laugh

测样品时悬液一般采用生理浓度的钙离子（大约1mM），因为细胞外液钙离子浓度会影响细胞内液钙离子浓度，特别是细胞膜是细胞膜上钙离子通道比较丰富的细胞，比如血小板、肌细胞等。在测最小值应用不含钙离子的溶液并加EGTA尽可能去除细胞外钙，测最大值时用含钙液并加TritonX100使细胞外钙充分进入胞内。

参与者：99shaoshuai

谢谢谢谢