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标签: RT-PCR 细胞量

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DXY网友xiss:理论上50个cell就可以,但是实际操作中我只看到过牛人从100个cell里面提出来过(用LCM逮的),自己提弄过1000cell的。没有用kit。不同点是用BCP代替氯仿,并且加糖原助沉淀,具体的好处不是很清楚,但是BCP用量小,而且在cell少的情况下,使用糖原可以尽量的降低误操作。

DXY网友九条虫:由于细胞的大小,RNA量以及你作用时间的差别,不同细胞在抽提RNA的量不一致,初作RNA提取时一般选择6孔板(或35mm版)做,每孔1.5-2ml,这样你的作用药品不用使用很多,RNA提取的量也有保证。以hela 为例,接种量在50万左右,待细胞长到90%时加药品(加入时间一般以你的作用时长为基点,估计到收集时长满),一般提取RNA作用时间不会太长,几个小时而已,所以细胞应长得接近饱和时加入药品,之后收集细胞,提取RNA步骤就一样了,提取的一孔RNA在10-20ug,这些已足够RT使用,具体提取方法站内有许多,搜索就可以了。

DXY网友xiaoy0314:看试剂盒的说明书,六孔板一个孔绝对足够。用trizol试剂盒处理,氯仿、异丙醇抽提。

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