将Caco-2 细胞培养于高葡萄糖(的DMEM培养基中( 1%非必需氨基酸， L-谷氨酰胺（L-glutamine)， 培养液含青霉素（ penicillin）10，000U/ml-链霉素（streptomycin）10，000ug/ml， 10%胎牛血清（Fetal bovine serum，FBS)），长于T-75组织培养曲颈瓶中，通入5%CO2(相对湿度90%)，置37℃培养箱中培养。

培养介质2～3天更换一次，当细胞达到90%融合后，以不含钙，镁离子的磷酸盐缓冲液(PBS)清洗后与胰酶(0.25%)—EDTA(1mM)于37℃一起孵育至分离(约5～10分钟)。吹打细胞使之脱落，置离心管中1000rmp离心5分钟。细胞重新悬浮于完全DMEM液中以1:3的比例分配至新培养瓶中。即完成传代。