由于可溶性MHC单体分子与TCR的亲和力很低，解离快，而多价分子可与一个特异性T细胞上的多个TCR结合，使其解离速度大大减慢。为此Altman等提出借助生物素—亲和素级联反应放大原理构建MHC I类分子四聚体。该方法通过基因工程技术把长度为15个氨基酸残基的生物素酶底物肽（Bio A substrate peptide，BSP）加在MHCI类分子如HLA-A2重链的羧基端形成融合蛋白，在体外按一定比例与日微球蛋白及特异的抗原短肽共孵育，使其折叠成正确的构象，成为pMHC复合物。将生物素标记在底物肽的赖氨酸残基上，使得一个标记荧光素的链亲和素与四个生物素标记的pMHC复合物结合形成四聚体，MHC-抗原肽四聚体与抗原特异性CFI-上的TCR结合后，即可以通过流式细胞仪定量检出体内抗原特异性CTL，并能将其分选出以供体外培养扩增和功能分析之用。