1、4%多聚甲醛常规灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中过夜。蜡块制作。切片，贴片。0.01MKPBS清洗5min×3后；

2、加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液（甲醇80ml+0.01MKPBS 100ml+30%过氧化氢）30min，以消除内源性过氧化物酶的影响，0.01MPBS清洗5min×3；

3、加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100+0.01MKPBS 100ml）30min，以增加细胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3；

4、加入用血清稀释液（牛血清白蛋白1.00g+0.01MPBS 100ml+叠氮纳0.08g）稀释的一抗，4℃存放24-48h；吸去抗体，0.01MKPBS洗5min×3；

5、加入0.01MKPBS稀释的的二抗，室温孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3；

6、加入ABC复合物之类的抗体，室温孵育2h，0.01MKPBS洗5min×3；蒸馏水迅速冲三次；

7、加入显色液，进行免疫组织化学显色，时间一般不超过30min，可不时在显微镜下进行观察，待细胞着色而背底颜色较淡时马上吸去显色液，用蒸馏水迅速冲三次后加入0.01MKPBS终止反应；

8、梯度酒精脱水之后，封片，拍照。