zyh43把支原体菌种接种在培养基中，然后冻存（-20度），在跟踪培养时发现相同的菌种，有的可以保存一年，而有的一个月就死亡，有时加入甘油，只是效果也不大！对此不知各位有什么看法呢？

1、假如不是同一培养液中的支原体，因为个体差异，保存的时间不一样是很正常的。

2、添加甘油作为保护剂，在-20°C～-30°C的普通冰箱冷冻保存时，因为添加保护剂的细胞混合物的共融点可能处在这个温度范围内，常会由于冰箱可能产生的微小温度变化引起培养基的反复熔化和再结晶，对菌体形成强烈的损伤，这也是一种可能。

3、培养液添加甘油是否合适，是否摇匀也影响菌体的保存时间。

4、培养条件是否都一致？（和第一条基本一样）

一年和一个月,相差可是很大啊,相同的菌种,出现这样的情况,我想这应该和你实验条件控制的关系,分析原因,我归纳以下几点:

1、你冻存的温度控制的不好,有可能冰箱的温度显示出现问题

2、几批的菌种个体差异很大

至于加入甘油上面的老兄分析的很好,有的时候加入甘油不一定能起到预想的效果。

建议你不加甘油，接种后15-20小时（培养基可要变红）后直接拿去-20度冻。但是不要反复冻溶。一般可以保存一年没问题。零度下保存也可以，只是时间不知道，几个月应该没问题。