固相多肽合成就是不断地在固相载体上加入α-氨基和侧链基团被保护的氨基酸。FMOC基团是用来保护α-氨基中的N的,去除保护基团后,再加入第二个氨基酸。产生的多肽通过一个连接臂将C端连接在树脂上,它可以被裂解下来。通常情况下,在多肽从树脂上裂解下来的同时去除侧链保护基团,一般采用哌啶去FMOC保护基团,肽树脂的裂解和侧链保护基团去除一般用强酸,比如三氟乙酸,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)是树脂去保护、氨基酸反应和洗涤的首选溶剂。 1. 合成步骤:
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HBTU: 2-(1H-Benzeotriazole-1-yl)-1,1,3,3,-tetramethyluroniumhexafluorophosphate |
2. 从树脂上分离下来: | |||||||||||||||||||||||||||||||||
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试剂K:TFA/苯甲硫醚/EDT/苯酚/水=87.5/5/2.5/2.5/2.5(v/v) |
3. 纯化: RP-HPLC纯化 ① HPLC条件: 流动相:A)0.1%TFA水溶液 B)0.1%TFA乙腈溶液 梯度:A/ B(90/ 40)到A/ B(40/ 90)30min 流速:1ml/min 温度:室温(23℃) 检测:214nm的紫外 样品:冻干的粗品 ② 步骤: a. 将粗品溶解在流动相中 b. 注入20-30mg(2-2.5ml)样品 c. 将主峰收集到50ml管中 d. 冻干 4. 鉴定: LC/MS条件: 流动相:A)0.05%TFA水溶液 B)0.1%TFA乙腈溶液 梯度:A/ B(90/ 10)到A/ B(40/ 60)15min 流速:1ml/min 温度:室温(23℃) 检测:214nm的紫外 MS API:ESI |
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