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标签: 多肽 制备

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            HBTU: 2-(1H-Benzeotriazole-1-yl)-1,1,3,3,-tetramethyluroniumhexafluorophosphate
  HOBt: N-Hydroxybnzotrizole•H2O
  NMM: N-methylmorpholine

固相多肽合成就是不断地在固相载体上加入α-氨基和侧链基团被保护的氨基酸。FMOC基团是用来保护α-氨基中的N的,去除保护基团后,再加入第二个氨基酸。产生的多肽通过一个连接臂将C端连接在树脂上,它可以被裂解下来。通常情况下,在多肽从树脂上裂解下来的同时去除侧链保护基团,一般采用哌啶去FMOC保护基团,肽树脂的裂解和侧链保护基团去除一般用强酸,比如三氟乙酸,N,N-二甲基甲酰胺(DMF)是树脂去保护、氨基酸反应和洗涤的首选溶剂。

1. 合成步骤:

步骤  溶液或溶剂 循环数 时间
1  DMF 2次 30s
2 含20%哌啶DMF溶液 1次 5min
3  DMF 1次  30s
4 含20%哌啶DMF溶液 1次 10min
5 DMF 6次  30s
6
Fmoc-AAF
HBTU
HPBt
NMM15
1次 30-60min
7 DMF 2次 30s
 
2. 从树脂上分离下来:
 
步骤  溶液或溶剂 循环数 时间
1  DMF 2次 30s
2 含20%哌啶DMF溶液 2次 10min
3  DMF 6次  30s
4 DCM 6次 30s
5 DCM 6次  30s
6 干燥 1次 10min
7 试剂K 1次 2.5h
 
  试剂K:TFA/苯甲硫醚/EDT/苯酚/水=87.5/5/2.5/2.5/2.5(v/v)

3. 纯化:

RP-HPLC纯化

① HPLC条件:

流动相:A)0.1%TFA水溶液

B)0.1%TFA乙腈溶液

梯度:A/ B(90/ 40)到A/ B(40/ 90)30min

流速:1ml/min

温度:室温(23℃)

检测:214nm的紫外

样品:冻干的粗品

② 步骤:

a. 将粗品溶解在流动相中

b. 注入20-30mg(2-2.5ml)样品

c. 将主峰收集到50ml管中

d. 冻干

4. 鉴定:

LC/MS条件:

流动相:A)0.05%TFA水溶液

B)0.1%TFA乙腈溶液

梯度:A/ B(90/ 10)到A/ B(40/ 60)15min

流速:1ml/min

温度:室温(23℃)

检测:214nm的紫外

MS API:ESI

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