各种浓度PAGE胶的配制(DNA电泳用) 50ml体系:
1、丙烯酰胺30%为29:1(质量比,丙烯酰胺:双甲叉丙烯酰胺) 2、TEMED 可以加到1ul/ml。 不同浓度丙烯酰胺和DNA的有效分离范围表
*表中给出的数字为与指示剂迁移率相等的双链DNA分子所含碱基对数目(bp). 凝胶的制备过程: 1、 按要求装配好垂直电泳板,两块玻璃板的两侧及底部用1%的琼脂糖封边,防止封闭不严而使聚丙烯酰胺液漏出。 2、 将装好的玻璃电泳板倾斜成45~60℃角。 3、 按表3配制所需%浓度凝胶的毫升数。 4、 加入TEMED后,立即混匀,缓缓倒入两玻璃板间的胶床中,直到液体接近溢出时为止。 5、 立即插入适当的梳子,密切注意防止梳齿下产生气泡,用一有力的夹将梳子夹在一边的玻璃板上,然后将玻璃板斜靠在物体上,使成10°角,可减少液体泄漏的机会。 6、 室温聚合一小时后,将玻璃板插入电泳槽中,上紧,倒入0.1XTBE缓冲液。 7、 小心取出梳子,加样。 |
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