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等电聚焦载体两性电解质的选择

标签: 等电聚焦 载体两性电解质 选择

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载体两性电解质必备的条件:

1.可溶性要好,为了保证等电聚焦过程中PH梯度的形成和蛋白样品的迁移,载体两性电解质必须具有很好的溶解性能。

2.紫外吸收低,不发荧光。由于制备分离时,检测蛋白质的方法通常是测量280cm的吸光度,因此要求载体两性电解质在280cm的吸光度尽可能低。

3.在等电点处必需有足够的缓冲能力,以便能控制pH梯度,而不致被样品蛋白质或其他两性物质的缓冲能力改变pH梯度的进程。

4.在等电点必需的足够高电导,以便使一定的电流通过,而且要求具备不同pH值的载体有相同的电导系数,使整个体系中的电导均匀,如果有局部电导过小,就会产生极大的电位降,从而其他部分电压就会太小,以致不能保持梯度,也不能使应聚焦的成分进行电迁移,达到聚焦。

5.分子量要小,便于与被分离的高分子物质用透析或凝胶过滤法分开。

6.化学组成应不同于被分离物质,不干扰测定。

7.无毒、无生物学效应。载体两性电解质对哺乳动物的组织培养,酶活性测定,免疫检测或注射到小白鼠或大鼠中都没有影响。

8.应不与分离物质反应或使之变性。总起来说,当一个两性电解质的等电点介于两个很近的pk值之间时,它在等电点的解离度大,缓冲能力强,而且电导系数高,这 就是好的载体两性电解质。

载体两性电解质是一些具有相近等电点的分子量为600-900Da的多氨基多羟基两性化合物的混合物,下面时配置不同pH范围等电聚焦凝胶的载体两性电解质的配方:

pH范围
载体两性电解质pH范围
凝胶中的百分比%
3.5-10
3.5-10
2.4
4-6
3.5-10
4-6
0.4
2
6-9
3.5-10
6-8
7-9
0.4
1
1
9-11
3.5-10
9-11
0.4
2

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