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  • 更新时间: 2009-12-09

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热失活是终止酶切反应的一种简便易行的方法。大多数最适反应温度是37℃的酶在65℃下温育20分钟即可失活。一些在65℃下不能失活的酶如将温度升高至80℃，温育20分钟也可失活。下表注明了每种酶的失活条件。

在50μl的反应体系中，37℃条件下，以0.5μg小牛胸腺DNA作为底物，加入5-10μl内切酶及相应缓冲液，反应60分钟，然后升温至65℃或80℃温育20分钟进行热失活。在上述混合液中加入0.5μg底物DNA（通常为λDNA），调节温度至最适反应温度，温育60分钟。若琼脂糖电泳显示底物部分或完全被消化，则表明该酶没有完全被热失活。

Enzyme Heat Inactivation (temperature) Aat II Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) No Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) No No Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (65°C) No Bae I Yes (65°C) No Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) No Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) No No Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) No Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) No Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) No Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) No No No No No Yes (65°C) Yes (80°C) No Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Cac8 I Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Dde I Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Eae I Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Fat I Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Hae II Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) No Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Kas I Yes (65°C) No Mbo I Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) No Nae I Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (80°C) Yes (80°C) No Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Pac I Yes (65°C) No Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) No No Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) No Yes (65°C) Yes (65°C) No Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (80°C) No Rsa I Yes (65°C) Yes (65°C) Sac I Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) No Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) No Yes (80°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Taq I Yes (80°C) No No No No No No No Xba I Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Yes (65°C) Zra I Yes (80°C)