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酵母菌基因组DNA的提取

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酵母 菌基因组 DNA的提取

一:仪器: 同方法一

二:试剂: SE缓冲液(1M山梨醇,0.1MEDTA pH7.5);溶菌酶(50mg/ml);20%PVP;蛋白酶K缓冲液(10mM Tris pH7.6  0.5% SDS 1mM EDTA);其余同前

三:操作

1.5ml  对数生长期细菌细胞

离心,12000rpm,1-2min

沉淀

溶于590ulSE缓冲液中混匀+10ul溶菌酶37℃,1hr

离心,12000rpm,8-10min

沉淀

溶于100μL,0.5μl蛋白酶K,混匀,37℃,1hr

加入1.2ml的CTAB/NaCL,200μl20%PVP 混匀  65℃,30min

等体积酚/氯仿/异戊醇混合液,混匀,

离心,12000rpm,4-5min

上清,以下操作与方法一中有机溶剂抽提、沉淀、干燥、除RNA 、复溶等步骤一致。

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