采用地高辛高效标记混合物(ROCHE) 标记DNA探针 将10 ng~3μg的DNA探针(基因组、质粒或基因片段)用蒸馏水稀释至16μl 煮沸10分钟使DNA变性,迅速放在冰上冷却,以防其重退火。 加入4μl地高辛高效标记混合物,振荡混匀 37℃下过夜培养 加入2μl 0.2M EDTA (pH 8) 使反应停止,并于65℃ 下10min加热降低其活性。 使用前煮沸探针10-20min 使用过的探针可以储存在-20℃的杂交缓冲液中,并能重复使用。 将DNA从凝胶转移到膜上 将凝胶在合适的电压下进行电泳得到单一的带型;染色并照相以参考大小。 小片段转移较有效。对于大的DNA片段,可增用短波透射仪进行2分钟的紫外切割步骤 将凝胶转移至可密封的Tupperware 塑料容器中 传统的转移方法 室温下在0.25的盐酸中培养40分钟(要盖住凝胶),使之脱去嘌呤 将2X置于MilliQ溶液中漂清 将2X置于变性溶液中培养20min以附着在脱嘌呤位点 在中性溶液中培养30min 如图所示,采用20X SSC作为转化溶液,进行毛细管转化 转化过夜(48小时脉冲场凝胶电泳) 另供选择的快速转化方法(Phil 的最爱) 室温下于0.25 M HCl中培养直至染色带变成黄色(20分钟) 将2X置于MilliQ溶液中漂清 如图所示,采用0.4N 的NaOH溶液作为转化溶液,进行毛细管转化 转化过夜(48小时脉冲场凝胶电泳) |
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