1、接种5ml LB，37℃摇床过夜培养（12小时）

2、离心，3000rpm，5min去上清

3、振荡混匀沉淀，分装在2个离心管中，spin一下，吸去上清，加入150μl的溶液I （50mmol/L葡萄糖，  25mmol/L  Tris·Cl（PH8.0），  10mmol/L EDTA（PH8.0） 在10lbf/in²（6.895×10⁴Pa）高压蒸气下灭菌15min（8磅），贮存于4℃，剧烈振荡5分钟打散菌体（菌体不打散容易在产物中出现较多蛋白）。

4、加入300μl溶液II（0.2mol/LNaOH，1%SDS，用2倍的溶液现配现用）后立即振荡混合均匀，处理2分钟后加入225μl溶液III（5mol/L乙酸钾 60ml，冰乙酸 11.5ml，水 28.5ml）混合均匀，12000rpm离心5min，取上清液中于新的离心管。

5、加120μl酸性苯酚/氯仿溶液，振荡混匀，12000rpm离心5min，再取上清液中于新的离心管中。

6、用120ul氯仿重复操作5。

7、加等体积的异丙醇或2倍体积的乙醇，混匀，12000rpm离心7min。

8、沉淀用70%乙醇洗涤两次，每次10min。50℃烘干后加适量无菌去离子水（ddH₂O）溶解，-20℃保存。