1、用合适的酶切割DNA并电泳。 2、于紫外灯下从凝胶上切下所要的DNA带,装入含1×TBE缓冲液的透析代内,用夹子封好袋口,并检查有无漏孔。 3、将透析袋(纵长)与两极间的边线垂直放于电泳槽内电泳,4~5V/cm电泳至DNA贴紧袋壁。 4、取出透析袋,挤出凝胶块,吸出袋内液体放入1.5ml的离心管内,10000rpm离心5min。 5、吸出上清放入离心管内,加入等体积的饱和酚和等体积的氯仿,振荡混匀,10000rpm离心5min,吸出上清放入新的离心管内。 6、加入1/10体积的3mol/L AaAc,2倍体积预冷的无水乙醇,于-20℃放置4~5h。 7、于4℃,10000rpm离心15min,弃上清。 8、用75%的酒精洗涤2次,每次均于4℃,10000rpm离心5min,弃上清。 9、真空抽干,并用适量1×TE溶解沉淀。如此即得所需DNA。 |
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