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从噬菌体文库中提取DNA的方法

标签: 噬菌体 提取DNA

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1取5ml噬菌体溶液放入无菌干净的小烧杯中,缓缓加入固体NaCl,使其终浓度为1M(0.292g),充分溶解后冰浴1小时。

24℃下11000rpm离心10min,取上清液于另一个干净烧杯中,将PEG6000加入烧杯中使其终浓度为10%W/V,约0.5克),磁力棒缓慢搅拌,冰水浴1.5小时,于4℃,15000rpm离心15min,弃上清。

3将沉淀溶于300μlTE(pH8.0),加等体积的酚/氯仿/异戊醇(25:24:1),吸吐混匀。

44℃,15000rpm离心15min,取上清液。

5在剩下的酚氯仿异戊醇的溶液中再加入200ul的TE,吸吐混匀。

64℃,15000rpm离心15min,取上清液。

7将由4和6获得的上清液混合,加等体积的氯仿,吸吐混匀后,4℃,15000rpm离心15min。

8加入1/10体积的3MNaAc(pH5.2)和2.5倍体积的无水乙醇吸吐混匀后至于-80℃30min以上,于4℃,15000rpm离心15min,弃上清。

9沉淀用70%乙醇洗2-3次,最后一次在4℃,15000rpm离心5min。

10用冰乙醇洗1-2次除去水份。

11沉淀烘干后加入200μlTE,测定DNA浓度,-20℃保存备用。

 

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