问:哪位大侠做过测定土壤脱氢酶活性的实验,请指点迷津啊,先谢谢了。我在做标准曲线时,加入萃取剂(甲醇或丙酮)后,各管的上部出现沉淀,红色溶液位于管的下部,上下颠倒摇匀后各管都变混浊。放置一段时间后各管都变澄清,但均为无色,如果不上下颠倒而只是振荡最终也会都变成为色的澄清溶液,这是为什么啊? 1 标准曲线的制作 1.1配制不同浓度的TTC液:从1mg/mlTTC溶液分别吸取1,2,3,4,5,6,7ml, 分别放入50 ml的容瓶中,以蒸馏水定容至50 ml,各瓶中TTC浓度分别为20,40,60,80.,100,120,140ug/ml. 1.2每只带塞离心管内加入tris-盐酸缓冲液(pH=8.4)2 ml+2 ml 蒸馏水+1 ml TTC液(从低浓度到高浓度依次加入),对照管加入2ml tris-盐酸缓冲液+3 ml 蒸馏水,不加TTC,所得每只离心管TTC含量分别为20,40,60,80.,100,120,140ug。 1.3 每管各加入连二亚硫酸钠1 g,振荡摇匀,使TTC还原,生成红色的TPF。 1.4在各管中加入5 ml 甲醇,振荡萃取3min,抽提TPF。 1.5取上清液于485 nm 波长下测吸光度值。 1.7绘制标准曲线。 答:我曾经做过脱氢酶活性的测定,基本步骤相同,不过最后使用甲苯提取的,做出来的标准曲线还不错,不过出现像上面的无色现象,出现无色会不会是由于萃取剂的问题呢。 |
→如果您认为本词条还有待完善,请 编辑词条
上一篇氨基酸薄层层析 下一篇Folin-酚测蛋白酶活
词条内容仅供参考,如果您需要解决具体问题
(尤其在法律、医学等领域),建议您咨询相关领域专业人士。
0