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乙酰胆碱酯酶染色

标签: 乙酰胆碱酯酶 染色

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问:我想利用乙酰胆碱酯酶染色将小鼠结肠平滑肌中的胆碱能神经显示出来,并用软件作定量分析,但不知该染色方法所用试剂及具体方法,上海何处可做该染色?请各位大侠帮帮忙!

另不知这种方法与将肠黏膜匀浆后测定乙酰胆碱酯酶,那一种更好?谢谢!

答:乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase)

染色步骤

1、下述溶液内孵育15分钟37C

碘化乙酰硫胆碱 12.5 mg
蒸馏水 2.5 ml
0.82%醋酸钠 15.8 ml
0.6%醋酸 0.5 m
2.94%柠檬酸钠 1.5 ml
0.75%硫酸铜 2.5 ml
0.165%铁氰化钾 2.5 ml
(总量25 ml)

2、水洗

3、苏木精染色1分钟

4、水洗1-2分钟

5、脱水、透明、封固

乙酰胆碱酯酶染色方法2

染色步骤

1、福尔马林前固定15~25分钟
2、去离子水充分冲洗两次,每次1分钟
3、在下述基质内孵育4小时,40C

碘化乙酰硫胆碱 5 mg
0.1M 马来酸氢钠缓冲液PH6.0 6.5 ml
0.1M枸缘酸钠溶液 0.5 ml
0.03M硫酸铜 1 ml
蒸馏水 1 ml
0.005M高铁氰化钾 1 ml

问:谢谢高人指点,我想问一下铁氰化钾哪里能买到呀,组织要冰冻处理吗?

答:铁氰化钾,一般化学试剂中心都可购到,我们实验室采用冰冻切片。需要注意的是,乙酰胆碱酯酶染色需要的是无离子水,入反应液时要用无离子水漂洗干净(3次,每次2min),反应液要现配现用,不能超过30min,反应液的PH值也很重要,否则会影响棕红色沉淀的效果。

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