一、实验试剂：

Trizol试剂（Invitrogen公司），PBS缓冲液；

二、具体过程：

1、细胞培养结束后，若是贴壁细胞，可以用移液器吸去培养基，并加入3ml左右的PBS洗一次（需要注意的是从冰箱中取出的PBS缓冲液温度要尽量回复到室温，避免给细胞冷的刺激）。吸去PBS后，即可加入适量的Trizol试剂，Trizol的量一般是每10cm²的面积加1ml的Trizol；若是悬浮细胞，可以进行离心，吸去上层的培养液，加入适量的Trizol，一般是5-10×10⁶细胞加1ml的Trizol。加入Trizol后，用移液器反复吹打细胞，使细胞充分裂解（见图1-图3）。判断Trizol加量是否合适的标准可以根据细胞溶解物的粘度来判断。在细胞刚溶解时，可以发现有丝状物出现，这是细胞的基因组DNA释放出来了，若Trizol量合适，吹打几次后，丝状物会消失，液体粘稠性下降；若Trizol量过少，丝状物往往一直存在，液体粘稠性大，可以继续补加Trizol。若Trizol的量过少，会导致抽提的RNA中有较多的基因组DNA污染。由于Trizol试剂中含有强烈的RNA酶抑制剂，因此细胞充分溶解在Trizol中后就不用担心RNA的降解。

2、溶解了细胞的Trizol在室温静置10min后，转移到1.5ml离心管中，后续可以按照Trizol试剂的标准操作抽提总RNA。也可以把此Trizol试剂保存在生物冰（低于15℃即可）邮寄给我们，由我们来完成后续的抽提过程。

图1 用移液器吸去细胞培养液

图2 加入PBS洗涤一次

图3 加入Trizol充分溶解细胞