三、转化子DNA 的快速鉴定－快速细胞破碎法

（1）挑取转化平板上的单菌接种于含相应抗生素的2ml LB中，37℃振荡培养至A590值为0.6～0.8。

（2）取1ml菌液至1.5ml Eppendorf管中，9000rpm离心9min，去尽上清。

（3）加入70μl Cracking Gel缓冲液[1mol/L Tris ?HCl(pH6.8)10ml,20%SDS 10ml, 250mmol/L EDTA 1.6ml,蔗糖27.2g, 1.2%溴酚蓝1.67ml，加双蒸水至200ml]，混匀后，37℃水浴30min以上。

（4）15000rpm离心15min。

（5）吸取上清点样电泳，观察。

四、转化子DNA 的酶切鉴定

1、转化子DNA 的快速少量抽提

（1）同本节　二.（三）.1。

（2）菌液移至5ml Eppendorf 管中，9000rpm,离心9min，去上清。

（3）加溶液Ⅰ100μl，溶液Ⅱ200μl，溶液Ⅲ150μl，混匀，冰浴10min。

（4）15000rpm离心15min。

（5）吸取上清，加入异丙醇1ml混匀，置室温15～30min。

（6）15000rpm离心15min，弃上清，加入75%乙醇洗涤2次。

（7）离心弃上清，真空抽干，加入适量1×TE溶解DNA 。

（8）取少量DNA 电泳，观察浓度。

2、转化子DNA 的小量酶切鉴定同质粒DNA 的小量酶切鉴定，见本节　一（三）。

五、重组子DNA 的进一步鉴定

可用Southern印迹杂交法或斑点杂交法等进一步鉴定，详见本节四。

[附]电泳洗脱法回收酶切DNA 片段

（1）用合适的酶切割DNA 并电泳。

（2）于紫外灯下从凝胶上切下所要的DNA 带，装入含1×TBE缓冲液的透析代内，用夹子封好袋口，并检查有无漏孔。

（3）将透析袋（纵长）与两极间的边线垂直放于电泳槽内电泳，4～5V/cm电泳至DNA 贴紧袋壁。

（4）取出透析袋，挤出凝胶块，吸出袋内液体放入1.5ml的离心管内，10000rpm离心5min。

（5）吸出上清放入离心管内，加入等体积的饱和酚和等体积的氯仿，振荡混匀，10000rpm离心5min，吸出上清放入新的离心管内。

（6）加入1/10体积的3mol/L AaAc,2倍体积预冷的无水乙醇，于-20℃放置4～5h。

（7）于4℃，10000rpm离心15min，弃上清。

（8）用75%的酒精洗涤2次，每次均于4℃，10000rpm离心5min，弃上清。

（9）真空抽干，并用适量1×TE溶解沉淀。如此即得所需DNA 片段。