摘要:1、连接缓冲液的影响：大体上缓冲液含有以下组分：20-100mmol/L的Tris-HCl，较多用50mmol/L，pH的范围在7.4-7.8，较多用7.8，目的是提供合适酸碱度的连接体系；10mmol/L的MgCl2，作用是激活酶反应；1-20mmol/L的DTT，较多用10mm[阅读全文:]
摘要:基因治疗的概念：基因治疗(gene therapy)就是用正常或野生型(wild type)基因矫正或置换致病基因的一种治疗方法。在这种治疗方法中，目的基因被导入到靶细胞(target cells)内，他们或与宿主细胞(host cell)染色体整合成为[阅读全文:]
摘要:T4噬菌体DNA连接酶不同于大肠杆菌DNA连接酶，它可以催化平端DNA片段的连接（Sgaramella和Khorana，1972;Sgaramella和Ehrlich，1978），由于DNA很容易成为平端，所以这是一个极为有用的酶学物性。有了这样的物性，才能使任何DN[阅读全文:]
摘要:QUOTEjulianne: been using sod acetate- isoprop precipiation with no problems all the while.QUOTETurtle: my suggestion would be to ethanol precipitate,QUOTEfor PCR product purification used for cloning[阅读全文:]
摘要:热失活是终止酶切反应的一种简便易行的方法。大多数最适反应温度是37℃的酶在65℃下温育20分钟即可失活。一些在65℃下不能失活的酶如将温度升高至80℃，温育20分钟也可失活。下表注明了每种酶的失活条件。在50μl的反应体系[阅读全文:]
摘要:酶切的原理：DNA酶切一般分为质粒直接酶切和PCR产物酶切。限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上，并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类。Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质[阅读全文:]
摘要:DNA重组技术包括载体及外源DNA片段的酶切消化、目的片段的获得及纯化、目的片段与克隆载体的体外连接、重组子的筛选和鉴定等内容。DNA片段的克隆技术是分子操作的核心部分。 实验目的：学习DNA的酶切、纯化及外源片段与载体[阅读全文:]
摘要:磷酸钙-DNA 共沉淀法核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使DNA 附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA 仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA 可[阅读全文:]
摘要:Caution: EtBr is a powerful mutagen and is moderately toxic. Wear gloves when working. When EtBr conc. is >0.5 mg/ml: 1.Add sufficient water to reduce the concentration of EtBr to <0.5 mg/ml. 2.Add 1 [阅读全文:]
摘要:Hey everybody,I am working on a side-directed mutagenesis with the Stratagene℃ quickchange mutagenesis xl-kit. Here is my problem: My plasmid is 17kb big. Until now I have had no colonies on my plate.[阅读全文:]