摘要:生物界的丰富多彩很大程度上取决于严格调控下的基因的选择性表达。高等生物的细胞内约含有105个不同的基因，而主 基因在某个特定的细胞中，只有占15％的一小部分表达。而且在不同的细胞中，选择性表达的基础也是不同的。正[阅读全文:]
摘要:平端连接通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效 率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能 在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为 3'突出一个碱基的DNA[阅读全文:]
摘要:随着分子生物学技术的发展，检测基因结构和突变的方法不断涌现.尤其是PCR技术问 世以后，各种与PCR相结合的基因检测技术进一步推动了基因研究的发展.如不对称 PCR产物的直接测序、核糖核酸酶酶切法(Ribonuclease cleava[阅读全文:]
摘要:Taq DNA聚合酶是从一种水生栖热菌(Thermusaquaticus)yT1株分离提取的.yT是 一种嗜热真菌，能在70～75℃生长.该菌是1969年从美国黄石国家森林公园火山温泉 中分离的. (一)酶活性与热稳定性该酶基因全长2496个碱基，编码83[阅读全文:]
摘要:真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程，因此mRNA的3’末端都带有一段Poly A，这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5’端的序列各不相同，如何获得全长的cDNA，[阅读全文:]
摘要:General Advice PCR allows the production of more than 10 million copies of a target DNA sequence from only a few molecules. The sensitivity of this technique means that the sample should not be contam[阅读全文:]
摘要:Recommended Reagent Concentrations: Primers: 0.2 - 1.0 uM Nucleotides: 50 - 200 uM EACH dNTP Dimethyl sulphoxide (DMSO): 0 - 10% (v/v) Taq polymerase: 0.5 - 1.0 Units/50ul rxn Target DNA: 1 ng -[阅读全文:]
摘要:Topics • What is the Polymerase Chain Reaction? • History and (pre-history) of PCR • How PCR works • Optimising PCR • Fidelity, errors and cloning • PCR primer desi[阅读全文:]
摘要:Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.* The 10x PCR buffer contains: 500 mM KCl; 100 mM Tris-HCl (pH 8.3); 15 mM [阅读全文:]