摘要:firstofjk：大家好，如何在一个真核细胞表面连接上一段DNA呢？另外如何让真核细胞表面呈正电荷？生命经纬网友雾失楼台：为啥要这样做呢？生命经纬网友Sayid认为：有意思，我也大胆设想下1，膜外侧带正电一般需要高盐高电离环[阅读全文]

摘要:独1无2：我用带GFP的质粒转染到Ca Ski 细胞可见GFP的表达，但是一天后用同样的质粒转染到BJ 细胞23小时却没有看到任何荧光，在细胞周围看见疑似细菌污染，请问细菌污染会影响质粒的转染吗？生命经纬网友爱吃葡萄的猫认为：[阅读全文]

摘要:ppsz：我准备作细胞转染，但用试剂盒提质粒的过程中很难避免污染，请问高手，质粒污染后应当怎样灭菌，因为我用的是小提质粒，量很少，不能过滤除菌，谢谢大家了。生命经纬网友ahdongyh认为：实验中当然尽量避免污染最好了～转[阅读全文]

摘要:问：我要用上清液做Elisa，但是上清液中的蛋白浓度不够，请问有什么方法可以把蛋白浓缩一下?答：蛋白质浓缩技术是免疫学中常用的手段，现介绍几种常用的浓缩技术。1、透析袋浓缩法利用透析袋浓缩蛋白质溶液是应用最广的一种[阅读全文]

摘要:问：有些细胞生长周期很长（如83hours），如果转入诱导其凋亡的质粒后，生长会更慢，细胞数目会更少，这类细胞用什么方法比较容易得到稳定细胞株？希望有经验的战友给予帮助，非常感谢！答：如果你转入的是有诱导凋亡的基因，那[阅读全文]

摘要:pazj：我的细胞转染48h后在荧光显微镜观察，细胞形态还正常，消化传代以后加G418做稳转，加药以后头两天看，细胞形态还是正常的，但是第三天开始就缩小成小圆点了，感觉就和加胰酶消化后的细胞形态，不知道这个时候细胞是死[阅读全文]

摘要:DXY网友mavisw提问：我用六孔板做细胞转染，转后要做western blot检测，今天裂解转染后的细胞时直接往六孔板的每个孔中加入了400微升的细胞裂解液，收集离心后未见沉淀，不知道用裂解产物做western blot蛋白含量够不够？DX[阅读全文]

摘要:DXY网友mao_xianwang问：最近测酶活性，但觉问题一大堆！1、接种六孔板时如何尽量让细胞接种均匀？2、给细胞染毒时我听说有两种方案，比如说染三天毒（1）先接种20%-30%，三天之后收获时刚好长满（2）一开始就接种70%-80%，然后以[阅读全文]

摘要:问：做ALP定量测量，把细胞种在96孔板中，用南京建成的ALP试剂盒，测定其A值。如何同时测定细胞的总蛋白量？细胞拿去做ALP了，做蛋白测定用什么细胞呢？答：检测ALP活性可以把细胞裂解，测定蛋白浓度，做内参调平，检测每mg蛋白[阅读全文]

摘要:Apoptosis-DNA ladder Assay 1. Collect culture media, add 1 ml of trypsin to cell mono1ayer on 100-mmol/L dishes, scrape the cells, harvest cells (culture media and cell monolayer) by centrifugation (2[阅读全文]

摘要:问：细胞稳定转染建系后，转染的质粒细胞内本身有较高表达，我的质粒是点突变的质粒，我做的是稳定转染，按理论稳定建系后不应该对细胞增值有影响的。根据实验设计，我往已经稳定建系的细胞中，再瞬时转染了带报告基因的另一[阅读全文]

摘要:华之风问：请教园里战友，本人拟用siRNA转染做平滑肌细胞，观察基因沉默后效果的，但是我们实验室环境不太好，细胞培养容易污染，想加双抗，但不知道加双抗对基因转染沉默有无影响，谢谢！生命经纬网友hainblue认为：有影响的，[阅读全文]

摘要:zhangcy2004问：细胞转染后建立稳转细胞系大多用G418来杀，可是这种抗生素的选择是根据什么来确定的呢？还可以用其他的抗生素吗？如果一个载体上有两个抗生素基因，氨苄青霉素和新霉素，那么建立稳转细胞系时该用哪种抗生[阅读全文]

摘要:转染是否成功的影响因素很多，如需要转染的细胞类型（对于困难的细胞系尤其如此），需要被转染的分子（DNA、RNA、寡核苷酸、蛋白质），转染试剂等。但无论在何种情况下，转染的成功均取决于转染效率、低细胞毒性以及重现性这几个[阅读全文]

摘要:生命经纬网友fxlys412：我是刚刚开始接触实验的，对很多东西我都不太懂。所以想请教下各位达人。我的问题是：要将一外源性基因转染PC3细胞，然后观察抗肿瘤药物对细胞的凋亡影响。我现在不知道如何下手，是用腺病毒转染还是[阅读全文]

摘要:问：最近的一个实验困扰我许久，就是关于给药剂量的问题，具体如下： 我在培养瓶中按1*10E6密度观察了心肌细胞的搏动和药物的干预情况，接下来想做MTT，需要用96孔板做，是否还需要保持原来的密度，或可以降到5*10E5呢，希望[阅读全文]

摘要:问：我要分离细胞器，先要破碎细胞。查文章是用Polytron匀浆器或Dounce匀浆器或者Potter-Elvehjem匀浆器。请问它们有什么区别吗？价格是多少呢？细胞破碎能用玻璃的普通匀浆器代替吗？答：不同的细胞器分离的方法是不同的，因[阅读全文]

摘要:培养基1、关于培养基，如果不是买液体的，那么其ph问题一定要给予充分重视！配置过程中的调解我就不说了，能用ph计最好！2、关于培养基的保存，如果你有输液瓶，那么我建议你每一次打开以后，最好还是换一个胶塞。如果象我一样[阅读全文]

摘要:1、如何选用特殊细胞系培养基？ 培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞，很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。总之，首选MEM做粘附细胞培养、RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始。 2、何时须更换培养基[阅读全文]

摘要:常用设备准备室的设备：单蒸馏水蒸馏器、双蒸馏水蒸馏器、酸缸、烤箱、高压锅、储品柜（放置未消毒物品）、储品规（放置消毒过的物品）、包装台。配液室的设备：扭力天平和电子天平（称量药品）、PH计（测量培养用液PH值）、磁力搅拌器（[阅读全文]