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摘要:RNAi文库是人工构建的一系列能对众多基因表达进行干扰的siRNA或shRNA文库。[阅读全文]
摘要:RNA干扰是dsRNA介导的特异性基因表达沉默现象,是生物界一种古老而且进化上高度保守的基因表达调节机制。[阅读全文]
摘要:RNA:主要由四种核糖核苷酸组成,即腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、尿嘧啶(U)。天然的RNA并不象DNA那样呈双螺旋结构,而是单链线形分子。只有局部区域为双螺旋结构(约占RNA分子的50%)。RNA分子中的核苷酸至少75个,多的可达[阅读全文]
摘要:目的研究基因的表达和调控时,需要从组织或细胞中分离纯化RNA。RNA质量的高低经常影响RT-PCR、cDNA库构建和Northern Blot等分子生物学实验的成败。主要试剂Trizol是一种新型总RNA抽提试剂,内含异硫氰酸胍等物质,能迅速破[阅读全文]
摘要:在所有RNA实验中,最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶(RNA酶)的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定,一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程[阅读全文]
摘要:第一部分RNA 提取策略1、RNA降解的原因内源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因,因为人体细胞自身就是几十分钟(20min?)mRNA被降解一轮,所以不管是组织还是细胞还是液体状样本在离开其中细胞的最佳生活状态后都应该尽快[阅读全文]
摘要:人类染色体上基因序列测定的结果提示人类中基因的数量可能要远远小于以前的推测,也提示基因功能可能存在多样性。研究一个基因在不同的组织中的表达情况有助于了解基因功能的多样性。想研究某个基因在人体内各种组织中[阅读全文]
摘要:①电泳RNA所用器械如制胶的模具、梳子、电泳槽等用肥皂粉洗干净后用双蒸水冲洗二遍后在室温晾干备用。②用新的1XTBE配制1.2%琼脂糖凝胶,倒胶时溴化乙锭(EB)直接加入凝胶中。③制备好的琼脂糖凝胶板放入电泳槽后再加入经高压[阅读全文]
摘要:RNA Gel (Crawford Lab)Gel Electrophoresis of RNA (Beverly Faulkner-Jones)great tips on RNA gel electrophoresis. Northern Gel andTransfer (gopher://iubio.bio.indiana.edu)Using glyoxalated RNARNA Electr[阅读全文]
摘要:实验原理:基本同Southern Blotting,但因RNA是单链分子,必须消除局部区域形成的二级结构,在电场中泳动的距离才能反映它本身的大小,因而需使用变性胶进行电泳;操作过程中应特别注意防止RNA的降解。实验材料:经检测质量[阅读全文]
摘要:一、原理核酸(ribonucleicacid,RNA)分子在一定pH值的缓冲液中带有电荷,将其放入电场中,可向与其所带电荷电性相反的电极移动。聚丙烯酰胺凝胶具有分子筛效应,核酸分子大小、形状不同,故在电场作用下,核酸分子在聚丙烯酰[阅读全文]