摘要:问:大家好,我要做牛胰蛋白酶的表达,但是还没有找到相关的文献,有谁知道他的序列,是223个氨基酸残基。现在这谢谢大家了!答:看看是不是这个!http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/viewer.fcgi?db=nuccore&val=NM_0011137[阅读全文:]
摘要:问:我用中性蛋白酶酶解我的样品后,跑了SDS-PAGE电泳,结果泳道上出现了蛋白酶的条带,蛋白酶应该如何从样品中除去呢?是不是灭活后再离心就除去了?那为什么我离心后的样品中还有蛋白酶的存在呢?答:实在不行过个亲和色谱[阅读全文:]
摘要:问:大家好。最近在看文献过程中看到了类胰蛋白酶,一时搞不懂什么叫类胰蛋白酶,它有什么作用,有胰蛋白酶活性么?这对我的课题十分重要,希望大家帮帮忙,我先在这谢谢各位了!急盼答复。答:类胰蛋白酶指这种酶具有与胰蛋白[阅读全文:]
摘要:问:新鲜配制的胰蛋白酶需要调PH值吗?参考书上没有说要不要啊,可是配好的胰蛋白酶大多是偏酸的,到底怎么办啊?答:许多书上都说胰酶在偏碱的条件下活性高(PH=8.4?),但我从来不曾调PH值,用0.01M的PBS配了过滤,4度保存,几[阅读全文:]
摘要:问:吾欲纯化一种丝氨酸蛋白酶,为了保持其活性和防止其他酶的降解,吾欲加PMSF,行乎? 答:你不能加PMSF,因为PMSF是一种不可逆的丝氨酸蛋白酶抑制剂,可抑制羧肽酶Y,糜蛋白酶,Factor Xa,木瓜蛋白酶,纤溶酶,蛋白酶K,枯草杆[阅读全文:]
摘要:问:我想用该法测一种蛋白酶对混合蛋白底物(其实是昆虫体壁蛋白)的酶活。请问:像我这种情况,还有必要做酪氨酸标准曲线吗,用得找吗?结果的酶活力应该怎么表示?是相当于对照吸光值增加的百分比吗?对照的设计,除传统的先[阅读全文:]
摘要:答:质量比。不过我们都是用1:50。就是说每切50质量(比如微克)的目的蛋白用1质量的酶。答:对,是质量比。消化250g蛋白大约需要1g的酶,如果换算成BAEE单位的话,要视酶的质量了,基本上是1000-3000 BAEE U/mg这个范围,具体数[阅读全文:]
摘要:问:蛋白酶解肽段的纯化,去除杂质,去除,即可,不需要分离!请问怎么设计色谱条件呢?柱子,填料,流动相,流速??谢谢!! 问题比较菜! 答:要看你的蛋白和酶解以后片断的大小了,楼主是要保留蛋白片断去除酶解buffer 里的东西么[阅读全文:]