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PCR实验技术发展史
词条创建者:admin创建时间:07-08 11:28
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摘要:人类对于核酸的研究已经有100多年的历史。20世纪60年代末70年代初,人们致力于研究基因的体外分离技术。但是,由于核酸的含量较少,一定程度上限制了DNA的体外操作。Khorana于1971年最早提出核[阅读全文]

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PCR产物测序
词条创建者:admin创建时间:07-08 11:22
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摘要:PCR技术代替了为测序而反复进行的分子和模板制备步骤。PCR技术与自动测序技术相结合后,它将成为一种最快、最有效的测定核苷权序列的方法。本章主要综 述各种测模板的制备以及如何完成PCR产物的直接测序。与[阅读全文]

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PCR反应条件的选择及优化
词条创建者:admin创建时间:07-08 11:12
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摘要:PCR技术已经在生物学研究和临床医学检验领域中得到了广泛的应用,PCR技术也日臻完善。PCR技术操作简便,特异性强,敏感度极高,正因为敏感度高,很容易受其他因素的影响,因此要得到准确可靠的反应结果,需根[阅读全文]

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PCR产物的克隆
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:24
标签: PCR 产物克隆

摘要:PCR产物克隆大致分为两类,即平头连接和粘头连接。平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR 产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头;PCR 产物纯化后,可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min(利用该酶所具有的[阅读全文]

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PCR技术(十):PCR产物克隆方法
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:24
标签: PCR技术 产物克隆

摘要:平端连接通常情况下,PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接,但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性,能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基,使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分[阅读全文]

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PCR扩增产物的电泳分析
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:23
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摘要:凝胶电泳分琼脂糖电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种。 一、琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种非常简便、快速、最常用的分离纯化和鉴定核酸的方法。琼脂糖是从海藻中提取的一种线状高聚物。根据琼脂糖的溶解温度,把琼脂糖分为[阅读全文]

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PCR产物克隆(10)
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:23
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摘要:PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法,杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单,快速和高效的原因,成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明,并拥有全球TA Clonin[阅读全文]

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PCR产物克隆方法
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:22
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摘要:平端连接通常情况下,PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接,但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性,能在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基,使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分[阅读全文]

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PCR?from?bacterial?colonies
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:20
标签: 菌落 PCR

摘要:This procedure is used to analyze inserts in pUC-derived plasimids.1. Suspend E. coli colonies harbouring plasmids in 50 microliters of TE.2. Incubate for 5 min at 95 degrees or in boiling water.3. Mi[阅读全文]

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PCR product purification-Molecular Biology
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:19
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摘要:I have tried to purify my PCR products by using 3 different approaches:1) QIAQuick PCR purification kit: but when I run the gel to see its efficacy, there was simply nothing!! it cleaned everything in[阅读全文]

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PCR产物的纯化
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:17
标签: PCR产物 PCR纯化

摘要:Purification of PCR fragments for cloning(adapted from Bruce A. Roe, Department of Chemistry and Biochemistry, The University of Oklahoma, Norman, Oklahoma 73019 broe@ou.edu)After an aliquot of the PC[阅读全文]

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PCR扩增产物的检测分析
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:16
标签: PCR扩增 PCR检测 PCR分析

摘要:PCR扩增反应完成之后,必须通过严格的鉴定,才能确定是否真正得到了准确可靠的预期特定扩增产物。凝胶电泳是检测PCR产物常用和最简便的方法,能判断产物的大小,有助于产物的鉴定。凝胶电泳常用的有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯[阅读全文]

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pcr mutagenesis-Molecular Biology
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:12
标签: pcr mutagenesis

摘要:In the end of the PCR process,do you destroy the parental plasmid? If not,it will give you the background.Ah,the PCR by mutagenesis problem.The efficiency depends on the methods used.The use of enzyme[阅读全文]

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PCR各处应用模式
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:11
标签: PCR 应用模式

摘要:一、兼并引物(Degenerate Primer)PCR密码子具有兼并性,如表22-4,单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的,但可以设计成对兼并引物,扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变,但核[阅读全文]

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PCR产物的电泳鉴定
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:08
标签: PCR产物 电泳鉴定

摘要:一、准备工作1、实验器具与材料:(1)移液枪:10ul(2)吸头:20ul(3)吸头台:放置200ul和20ul的吸头一个(4)三角烧瓶:50ml一个(5)琼脂糖2、实验器具的处理与准备(1) 塑料制品:(包括吸头等)送至高压3次,试验前将枪头放入吸头台。[阅读全文]

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PCR产物的回收纯化
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:08
标签: PCR产物的回收纯化

摘要:PCR产物的回收纯化的目的是:高质量DNA;除去蛋白(如酶等),RNA,无机盐(NaCl超过150 mM对T4连接酶有抑制作用),小于100 bp的短片段(如引物DNA),有机小分子(如dNTP、Agrose、EB、甘油、矿物油)。本篇文章来源于网络,如有异议请[阅读全文]

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PCR-SSCP实验步骤
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:07
标签: PCR-SSCP 实验步骤

摘要:一.样品的制备1. 设计引物。用Oliga6.0对目的基因进行分析,设定引物,引物长度18-21个碱基,扩增片段以200-300bp最为合适。2. PCR扩增并检测。根据不同的引物挑选适合的退火温度进行PCR扩增。扩增产物用2-2.5%的琼脂糖胶跑[阅读全文]

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PCR剪接VHCDR3基因文库和VL基因构建scFv基因文库
词条创建者:admin创建时间:12-09 23:06
标签: PCR剪接 VHCDR3基因文库 VL基因 scFv基因文库

摘要:[器材和试剂]Winard PCR纯化试剂盒(Promega)PCR试剂和设备用于连接scFv和pHENl DNA以及将scFv文库电转化到大肠杆菌TGl株的试剂和设备FDSEQ引物扩增的VHCDR3基因文库和VL基因,[方法]1. 配制4个25ulPCR反应液,包含:去[阅读全文]

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PCR技术的原理与方法
词条创建者:admin创建时间:12-09 22:30
标签: PCR技术 原理 方法

摘要:PCR定义PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放[阅读全文]

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PCR基础知识
词条创建者:admin创建时间:12-09 22:30
标签: PCR 基础知识

摘要:分子生物学技术正以惊人的速度发展,特别是近20年来已经成为生命科学的一个主要的生长点。1976年cDNA克隆技术的建立,使分子生物学更加迅速广泛地渗透到医学各学科,发展了各学科的分子理论基础。1985年Mullis首先描述的[阅读全文]

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