摘要:末代沙皇尼古拉二世、1918年的流行性感冒病毒、电影《侏罗纪公园》，以及辛普森杀妻案，这四件事情到底有什么相关？答案是没有。只不过近十几年来生物技术的一项新发明，把它们给连在一块了。这项技术就是“聚合酶链反应&[阅读全文]

摘要:早在1958年科学家分离出DNA聚合酶（ polymerase）后，就曾设想利用DNA聚合酶扩增大量DNA片段。但当时由于DNA测序较难，没有核苷酸合成技术及耐热性的DNA聚合酶没有得到分离等原因而没有发展起来。直到1985年，美国的Cetus人[阅读全文]

摘要:PCR的最早设想核酸研究已有100多年的历史，本世纪60年代末、70年代初人们致力于研究基因的体外分离技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性，与合适的引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重[阅读全文]

摘要:PCR的假阳性问题是在PCR诞生之初就被深刻认识到了，同时由于造成假阳性的因素相对单一，因此假阳性并不是困惑检验工作的主要原因。如果一个项目只是阳性率高敏感性好的话，那么可以认为其阴性结果具备很高的可排除性，仍[阅读全文]

摘要:随着兽医防疫工作重要性的逐步提高，PCR检测技术已被兽医工作者比较广泛认可，已经从实验室研究走进了临床应用阶段。如何提高PCR检测质量，已成为实验室技术人员不可回避的一个问题，它直接影响实验室检测结果的可信度和[阅读全文]

摘要:PCR的假阳性问题深受重视，但PCR假阴性问题相对于临床检测更为严重。其实PCR假阳性的问题是比较单纯的，一般仅涉及污染和引物的非特异性问题。而污染可以通过严格的实验室管理，合理的环境设置，以及加入UNG酶抗污染基本可[阅读全文]

摘要:Polymerase Chain Reaction1.Add the following to a microfuge tube:10 ul reaction buffer1 ul 15 uM forward primer1 ul 15 uM reverse primer1 ul template DNA5 ul 2 mM dNTP8 ul 25 mM MgCl2or MgSO4(volume v[阅读全文]

摘要:Materials:sterile water10X amplification buffer with 15mM MgCl2-10 mM dNTP50 μM oligonucleotide primer 150 μM oligonucleotide primer 25 unit/μl Taq Polymerasetemplate DNA (1 μg genomic DNA[阅读全文]

摘要:Nature of the InsertThe cloning of PCR-amplified fragments into a linear vector is typically a rapid and efficient process. However, not all PCR fragments will clone with the same efficiency into the [阅读全文]

摘要:A commonly used PCR buffer, includes only KCl, Tris and MgCl2(for example,Perkin Elmer Cetus);a somewhat more complex buffer was previously proposed for multiplex reactions of the DMD gene exons (Cham[阅读全文]

摘要:1.IntroductionPolymerase chain reaction (PCR) has rapidly become one of the most widely used techniques in molecular biology and for good reason: it is a rapid, inexpensive and simple means of produci[阅读全文]

摘要: PCR反应的关键因素主要有引物的选择与设计，酶的质量。模板的制备，在前二者都稳定可行的情况下，PCR模板的制备尤为重要。模板处理方法的选择及操作人员的基 本技能，决定分离模板核酸(DNA或RNA)的质和量及PCR的成败。而提[阅读全文]

摘要:1.protocol(1)collect piece of tissue (e.g., pieces of a leaf or flower) in Eppendorf tube containing 40 ml 0.25 N NaOH(2)put in boiling H2O for 30 sec (optimum may need to be determined for each type [阅读全文]

摘要:1.DMSO and glycerolRecommended by a number of authors to improve amplification efficiency and specificity of PCR. However,in the multiplex reaction these enhancers gave conflicting results.For example[阅读全文]

摘要:Designing PCR primers1.length of individual primers between 18-24 bases. Longer primers (30-35 bp) seem to work in more similar cycling conditions compared with shorter primers, and can make multiplex[阅读全文]

摘要:1、引物设计由美国Perkin-elmer公司合成，引物末端标记有生物素（1）扩增体系10×PCR buffer5μlPCR引物10μl4×dNTP10μlTaq polymerase0.25μlDNA模板10μlD、W14.75μlTotal50μl（2） 扩增程序[阅读全文]

摘要:多聚酶链式反应(polymerase chain reaction)简称PCR技术，是80年代中期发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术。此法操作简便， 可在短时间内在试管中获得数百万个特异的目的DNA序列的拷贝，PCR技术虽然问世仅数年时间[阅读全文]

摘要:RT-PCR灵敏度：在琼脂糖凝胶分析中看到少量或没有RT-PCR产物。 可能原因： 1、RNA被降解 建议解决方法在用来验证完整性之前先在变性胶上分析RNA使用良好的无污染技术分离RNA； 在将组织从动物体取出后立刻处理在100％甲酰[阅读全文]

摘要:最常用的基因分离方法需要建立组织或细胞RNA的cDNA库，然后用抗体或 DNA探针筛选出感兴趣的基因。虽然这个方法已成功地克隆了大量基因，但建立和筛 选CDNA库是一项非常耗时。费力的工作，而且用寡聚核苷酸作探针进行筛选[阅读全文]

摘要:PCR技术代替了为测序而反复进行的分子克隆和模板制备步骤。PCR技术与自动测 序技术相结合后，它将成为一种最快、最有效的测定核苷权序列的方法。本章主要综 述各种测模板的制备以及如何完成PCR产物的直接测序。与传统的将[阅读全文]