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摘要:1. 对每个基因设计并检测两到四个siRNA 序列为了找到潜在靶位点,扫描靶基因中的AA序列。记录每个AA 3’端19个核苷酸作为潜在siRNA 靶位点。潜在靶位点需通过GENBANK数据库的BLAST分析,去除那些与其它基因明显同源[阅读全文]
摘要:siRNA Database Searchable database of Silencer ™ Validated and Pre-designed siRNAs to >34,000 human, mouse, and rat targets. All siRNAs in the database have been designed for maximum potency and[阅读全文]
摘要:Cells are lysed in the soil by any number of methods including enzymatic treatment, sonication, sodium dodecyl sulfate (SDS), microwaves and bead beating.本篇文章来源于网络,如有异议请联系我们,我们将在[阅读全文]
摘要:在合成cDNA的反应中事先加入的3'末端带Oligo(dG)的SMART引物,由于逆转录酶以mRNA为模板合成cDNA,在到达mRNA的5'末端时碰到真核mRNA特有的“帽子结构”,即甲基化的G时会连续在合成的cDNA末端加上几个(dC),SMART引物的Ol[阅读全文]
摘要:siRNA序列设计注意事项:选择以AA开头的19-23nt长的序列;靶定序列从起始密码子下游100个nt处开始,到终止密码子上游100nt处结束。本篇文章来源于网络,如有异议请联系我们,我们将在3个工作日内作出处理。[阅读全文]
摘要:化学合成的siRNA 与生物合成siRNA 相比,有以下优点:?操作简便,研究人员得到合成好的siRNA 后,进行简单的稀释处理即可实验。?转染效率高,相对于分子量较大的DNA 质粒,其转染效率高。?对细胞的或者组织的毒副作用小。?可[阅读全文]
摘要:一、体外制备1、化学合成2、体外转录 3、用RNase III 消化长片断双链RNA制备siRNA二、体内表达1、siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs2、PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达RNAi可以直接用于疾病相关基因的抑制,从[阅读全文]
摘要:关于设计siRNA以及siRNA设计对siRNA功能的影响,至今还没有可靠的规律。虽然我们可以通过对mRNA实验分析准确的找到一段基因的全部siRNA最佳作用位置,但这个过程十分耗时且昂贵,不推荐常规实验使用。一种做法是每个目标[阅读全文]
摘要:SNPs(single nucleotide polymorphism , SNP ,发音为 “snips”), 主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的 DNA 序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的 90% 以上。 [阅读全文]
摘要:当前,SNPs研究在国际上有很大的进展,NATURE、Science、New England 、PNAS等顶尖杂志在近几年发表了大量的论文,国内各种医学权威期刊几乎每期都刊登关于SNPs的论文。当然,国内与国外相比还是有很大差距的,这体现在国内的[阅读全文]
摘要:SNPs是指DNA序列上发生的单个核苷酸碱基之间的变异,在人群中这种变异的发生频率至少大于1%, 它是基因组中存在的一种数量非常丰富的变异形式,占人类基因组中遗传多态性的90%以上。针对不同人种基因组的测序结果表明,在[阅读全文]
摘要:点击下载pdf文件:Statistical Estimations of PCR Amplification Rates.pdf[阅读全文]
摘要:DescriptionSingle primer PCR allows amplification from known to unknown regions in chromosomes, phage, plasmids, large PCR products and other sources of DNA.At sufficiently low stringency, any primer [阅读全文]
摘要:The following colony PCR protocol has been designed to be performed in individual reaction tubes. We usually test three colonies from each transformation along with a wild-type control. A series of fi[阅读全文]
摘要:From: Molecular Biology: Current Innovations and Future Trends. Eds. A.M. Griffin and H.G.Griffin. ISBN 1-898486-01-8 1995 Horizon Scientific Press, PO Box 1, Wymondham, Norfolk, U.K. In vitro site-d[阅读全文]
摘要:真核细胞的mRNA在加工过程中有一个比喻为“穿鞋戴帽”的过程,因此mRNA的3’末端都带有一段Poly A,这是利用逆转录酶制备cDNA文库的基础。但是由于cDNA的5’端的序列各不相同,如何获得全长的cDNA,[阅读全文]
摘要:Recommended Reagent Concentrations: Primers: 0.2 - 1.0 uM Nucleotides: 50 - 200 uM EACH dNTP Dimethyl sulphoxide (DMSO): 0 - 10% (v/v) Taq polymerase: 0.5 - 1.0 Units/50ul rxn Target DNA: 1 ng -[阅读全文]
摘要:人类基因组中存在着广泛的多态性,最简单的多态形式是发生在基因组中的单个核苷酸的替代,即单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)。SNP通常是一种二等位基因的(biallelic),即二态的遗传变异,SNP的数[阅读全文]